[发明专利]利用生物反应器进行多肉植物繁殖的方法

权利要求书

1.利用生物反应器进行多肉植物繁殖的方法，其特征在于，包括如下步骤：

（1）外植体灭菌及诱导

取外植体消毒灭菌后接种于诱导培养基中，诱导产生胚性愈伤组织，该胚性愈伤组织多为玻璃化状态；

其中，诱导培养基的组成为：MS培养基+BA 0.5~2mg·L^-1+琼脂7g·L^-1+蔗糖30g·L^-1，pH 值为5.8；

（2）生物反应器增殖

将诱导产生的胚性愈伤组织接种于添加有液体增殖培养基的生物反应器中，暗光培养2~4个周期，获得大量胚性材料；

其中，暗光培养2个周期，获得大量嫩绿色胚性材料，该嫩绿色胚性材料有较明显的枝叶结构；或

暗光培养3~4个周期，获得大量无色透亮胚性材料，该无色透亮胚性材料枝叶膨大成团状；

其中，液体增殖培养基的组成为：MS培养基+BA 0.5~2mg·L^-1+NAA 0~0.5mg·L^-1+蔗糖30g·L^-1，pH 值为5.8；

（3）干燥与萌发

将步骤（2）获得的嫩绿色胚性材料置于无菌条件下，用干燥、无菌气流脱水4-8h，然后置于光照条件下，于无菌干燥瓶中继续脱水培养1-2个月；当脱水培养的胚性材料略显萎蔫时，将其接种于萌发培养基中，1-2个月后形成正常丛生芽；或

将步骤（2）获得的无色透亮胚性材料置于无菌条件下，用干燥、无菌气流脱水4-8h，然后置于光照条件下，于无菌干燥瓶中继续脱水培养1-2个月；所述无色透亮胚性材料逐渐形成内部中空的丛生体细胞胚胎；将所述内部中空的丛生体细胞胚胎接种于萌发培养基中，1-2个月后形成正常丛生芽；

其中，萌发培养基的组成为：MS培养基+BA0.5mg·L^-1+琼脂8~10g·L^-1+蔗糖30g·L^-1，pH 值为5.8；

（4）壮苗与移栽

将步骤（3）培养的正常丛生芽接种于壮苗培养基中，培养为可移栽的丛生苗，进行移栽即可。

2.根据权利要求1所述的利用生物反应器进行多肉植物繁殖的方法，其特征在于，所述壮苗培养基的组成为：1/2MS培养基+BA 0~0.5mg·L^-1+琼脂 7g·L^-1+活性炭0.5 g·L^-1+蔗糖30g·L^-1，pH 值为5.8。

3.根据权利要求1或2所述的利用生物反应器进行多肉植物繁殖的方法，其特征在于，在步骤（2）中，所述生物反应器的气流量保持在300 ml•min^-1。

4.根据权利要求1或2所述的利用生物反应器进行多肉植物繁殖的方法，其特征在于，所述外植体为种子，灭菌后的种子在诱导培养基中培养3个月后，逐渐长成完整植株，取该植株的叶片接种于继代培养基中，1~3个月后，诱导产生胚性愈伤组织。

5.根据权利要求1或2所述的利用生物反应器进行多肉植物繁殖的方法，其特征在于，所述外植体为从母株采集的叶片，将该叶片置于清洁、通风、干燥的环境中，7天后，待叶柄伤口处形成保护层，于连续晴日的中午，将叶片置于肥皂水中浸泡20min，然后流水冲洗1h，之后在超净工作台中进行灭菌，将灭菌后的叶片接种于诱导培养基中，1~3个月后，叶片的伤口处形成胚性愈伤组织。