[发明专利]一种定位木本植物花粉管蛋白的免疫荧光方法及其试剂盒

权利要求书

1.用于定位木本植物花粉管蛋白的试剂组合，其特征在于，包括固定液、酶解液、封闭液、一抗和二抗；所述固定液中含有PEPES、蔗糖、TritonX-100、多聚甲醛、NaCl、KCl、Na₂HPO₄和KH₂PO₄，所述酶解液中含有纤维素酶、离析酶、NaCl、KCl、Na₂HPO₄和KH₂PO₄，所述封闭液中含有牛血清白蛋白、NaCl、KCl、Na₂HPO₄和KH₂PO₄，所述一抗为目的蛋白抗体，所述二抗为FITC标记的山羊抗兔二抗；其中，所述木本植物包括苹果。

2.根据权利要求1所述的试剂组合，其特征在于，所述固定液中蔗糖和多聚甲醛的质量百分含量分别为8-12％和4-6％，TritonX-100的体积百分含量为0.5-1.5％，PEPES、NaCl、KCl、Na₂HPO₄和KH₂PO₄的浓度分别为50-150mM、135-140mM、2.5-3.0mM、8-12mM和1.5-3mM，以水配制；优选地，所述固定液中蔗糖和多聚甲醛的质量百分含量分别为10％和4％，TritonX-100的体积百分含量为1％，PEPES、NaCl、KCl、Na₂HPO₄和KH₂PO₄的浓度分别为100mM、137mM、2.7mM、10mM和2mM。

3.根据权利要求1或2所述的试剂组合，其特征在于，所述酶解液中纤维素酶和离析酶的质量百分含量分别为0.3-1.0％和0.5-1.5％，NaCl、KCl、Na₂HPO₄和KH₂PO₄的浓度分别为130-140mM、2.5-3.0mM、8-12mM和1.5-3mM，pH值6.5-7，以水配制；优选地，所述酶解液中纤维素酶和离析酶的质量百分含量分别为0.5％和1％，NaCl、KCl、Na₂HPO₄和KH₂PO₄的浓度分别为137mM、2.7mM、10mM和2mM，pH值6.8；

其中，所述纤维素酶和离析酶分别为纤维素酶R10和离析酶R10。

4.根据权利要求1-3任一项所述的试剂组合，其特征在于，所述封闭液中牛血清白蛋白的质量百分含量为10％，NaCl、KCl、Na₂HPO₄和KH₂PO₄的浓度分别为130-140mM、2.5-3.0mM、8-12mM和1.5-3mM，pH值6.5-7，以水配制；优选地，所述封闭液中牛血清白蛋白的质量百分含量为10％，NaCl、KCl、Na₂HPO₄和KH₂PO₄的浓度分别为137mM、2.7mM、10mM和2mM，pH值6.8。

5.根据权利要求1-4任一项所述的试剂组合，其特征在于，所述一抗、二抗的免疫浓度均为1:100，以PBS缓冲液配制。

6.用于定位木本植物花粉管蛋白的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包含权利要求1-5任一项所述试剂组合。

7.利用权利要求6所述试剂盒定位木本植物花粉管蛋白的免疫荧光方法，其中，所述木本植物包括苹果；其特征在于，所述方法包括以下步骤：

1)花粉管体外萌发，用固定液固定，收集固定后的花粉管；

2)用酶解液酶解花粉管，收集酶解后的花粉管；

3)用封闭液封闭花粉管；

4)进行一抗免疫；

5)进行二抗免疫。