[发明专利]一种与杨树抗逆基因表达调控相关的内参基因及其应用

说明书

本发明公开了一种与杨树抗逆基因表达调控相关的内参基因及其应用，所述内参基因具有如SEQ ID NO.1所示的核苷酸序列，该内参基因相比较传统的杨树看家基因，在非生物胁迫下具有更高的稳定性，是一种更为理想的杨树抗逆相关基因表达调控相关的内参基因，该基因对杨树抗逆相关基因的表达水平的研究，以及系统地进行杨树的抗逆性研究具有重要意义，对进一步选育抗逆优良植株具有重要的指导作用。

技术领域

本发明涉及的是是基因工程的技术领域，尤其涉及的是一种与杨树抗逆基因表达调控相关的内参基因及其应用。

背景技术

杨树(Populus trichocarpa)是重要的绿化能源树种，大力发展杨树产业，对于森林资源的丰富，自然生态环境的改善大有裨益。杨树在我国主要分布于华北、西北等干旱和半干旱地区，干旱不仅会影响叶片的光合速率、枝条生长速率和干物质积累，也会使杨树干重减轻、材积减少，从而制约着杨树的速生丰产。干旱往往与高盐度引起的渗透胁迫有关，影响杨树的生长和产量。杨树作为重要的木本模式作物，在抗旱、抗高盐等抗逆境胁迫等分子遗传改良方面发展显著。随着基因工程技术的不断发展，抗逆基因的研究也越来越受到大家的青睐。因此，研究抗逆相关基因的表达水平不仅可以系统的研究杨树的抗病过程，还可以更好的指导杨树抗逆优良植株的选育。

实时荧光定量PCR(Quantitative real-time PCR)是最常用、最快速、最简单的基因表达水平定量分析的方法。作为强有力的检测基因表达谱的方法，它可以分析基因在不同生长时期和不同组织器官中的表达差异，以及不同环境条件下的样本间基因的表达差异等，它的优点主要表现在具有更高的灵敏度和特异性，并且与以前的分子技术相比有更广泛的动态范围。也正是这些优点使得它对内参基因的选取十分严苛。由于在PCR过程中的各种差异，结果的校正和标准化仍然是最具挑战性的问题。而内参基因的使用被认为是最合适的标准方法，因为其可以灵敏地修正RNA起始量和反转录效率等的差异，进而获取靶基因特异表达的真差。

理想的内参基因应当在任何情况下都能够稳定的表达。在实时荧光定量PCR表达分析中，看家基因是最为常用的内参基因。由于看家基因是细胞的重要组分，且表达稳定，因此在使用时无需验证其适用性，然而有研究表明，看家基因在不同的实验条件下表达也会有很大的差异(Suzuki et al.，2000；Thellin et al.，1999；Vandesompele et al.，2002)。一些常用的内参基因在一定条件下由于不稳定性的表达而不再适合作为内参基因，并逐渐被新的内参基因所取代。随着基因芯片技术和转录组测序技术的发展，利用基因表达数据挖掘新的内参基因已经成为基因研究者参考选择的一种有效方法。然而，目前这种方法仍未在木本植物中广泛应用，使得并不适合所有实验条件的传统内参基因仍被不少研究者沿用,这成为基因表达分析研究的一个弊端。