[发明专利]一种用于促进子宫内膜修复的胶原蛋白真皮材料及其制备方法

说明书

本发明公开了一种用于促进子宫内膜修复的胶原蛋白真皮材料及其制备方法。本发明提供了一种用于促进子宫内膜修复的胶原蛋白真皮材料及其制备方法，包括如下步骤：将胶原蛋白浸泡在多肽溶液中，即得到胶原蛋白材料；所述多肽包括胶原蛋白结合域、促进MSCs聚集域和位于二者之间的连接肽。本发明的实验证明，本发明的方法制备的胶原蛋白膜材料具有良好的生物相容性、可降解性以及低免疫原性等优异性，并且能够有效的促进骨髓间充质干细胞(hMSCs)聚集、分化，所引入的多肽改性能够增加MSCs的结合、聚集与分化，对宫腔粘连起到有效的屏障作用。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，尤其涉及一种用于促进子宫内膜修复的胶原蛋白真皮材料及其制备方法。

背景技术

宫腔粘连又称宫腔粘连综合征，主要临床表现为月经异常(月经过少或闭经)、周期性腹痛和不孕，即使妊娠也可引起反复流产、早产、胎盘粘连、胎盘植入等风险。而诱发宫腔粘连的主要原因就是子宫损伤。

目前，针对子宫内膜损伤修复的手术方法有限。主要有：

(1)通用的方法是通过早期干预进行。其中除了机械屏障如宫内节育器和Foley带气囊导尿管、术后全身给予雌激素治疗外，防粘连材料(主要是透明质酸、Intercoatgel)也被应用于宫腔粘连干预。早期干预虽然对子宫粘连有一定效果，但对子宫内膜严重损伤，无法解决内膜瘢痕问题，不能实现内膜功能性修复，且极易发生再次粘连。

(2)近期有研究应用人新鲜羊膜进行宫腔粘连分离后的术后创面修复，该法不能诱导瘢痕内膜自修复，且可能还存在免疫炎症和诱发感染等风险。

因此，探索促进子宫内膜损伤后功能性修复具有重要的临床意义。

发明内容

本发明的一个目的是提供一种胶原蛋白材料的制备方法。

本发明提供的方法，包括如下步骤：将胶原蛋白浸泡在多肽溶液中，即得到胶原蛋白材料；所述多肽包括胶原蛋白结合域、促进MSCs聚集域和位于二者之间的连接肽。

上述方法中，所述胶原蛋白结合域是TKKTLRT、CQDSETRTFY或WREPSFCALS；所述促进MSCs聚集为IKVAV、STNPKVL、GRGDSPC或EPLQLKM。连接域不进行限定，可以是任意氨基酸拼凑组成的组合，也可以不设置连接域。

上述方法中，所述多肽的氨基酸序列为序列1或序列2或序列3。

上述方法中，所述多肽溶液的质量百分含量为0-0.5％，且不为0；

溶剂可以为水或者PBS缓冲液，pH可以为7.0-7.4。

或所述多肽溶液和所述胶原蛋白的重量比为10:1-40:1。

或所述浸泡时间为0.5-8h或1-3h，所述浸泡的温度为4-30℃。

上述方法中，所述胶原蛋白按照包括如下步骤的方法制备：

1)将离体动物皮作为原料浸泡在强碱溶液中，得到碱处理后材料；

2)将所述碱处理后材料浸泡在磷酸氢二钠-磷酸二氢钾缓冲液中，得到磷酸氢二钠-磷酸二氢钾缓冲液处理后材料；

3)将所述磷酸氢二钠-磷酸二氢钾缓冲液处理后材料浸泡在含有脂肪酶和表面活性剂的溶液中，得到脂肪酶处理后材料；

4)将所述脂肪酶处理后材料浸泡在含有弱碱和表面活性剂的溶液中，得到弱碱和表面活性剂处理后材料(真皮组织基质)，即为胶原蛋白。

上述方法中，步骤1)中，所述强碱溶液的溶质为强碱，所述强碱为NaOH或KOH；

强碱溶液的溶剂为水。该步骤的作用是去除离体动物皮中的脂肪和杂蛋白；