[发明专利]鉴定番茄花叶病毒抗性基因的分子标记及其应用

权利要求书

1.用于鉴定番茄花叶病毒抗性基因的KASP引物，其包含：

正向引物1：5’-CAATATGCTACAAGCCAAATTACTC-3’，和

正向引物2：5’-CAATATGCTACAAGCCAAATTACTT-3’，

其中所述正向引物1和正向引物2分别连接有不同的标签序列。

2.如权利要求1所述的KASP引物，其中所述标签序列选自以下序列：

标签序列A：GAAGGTGACCAAGTTCATGCT，和

标签序列B：GAAGGTCGGAGTCAACGGATT。

3.如权利要求1所述的KASP引物，其包含：

正向引物1：5’-GAAGGTGACCAAGTTCATGCTCAATATGCTACAAGCCAAATTACTC-3’，和

正向引物2：5’-GAAGGTCGGAGTCAACGGATTCAATATGCTACAAGCCAAATTACTT-3’；或者

正向引物1：5’-GAAGGTCGGAGTCAACGGATTCAATATGCTACAAGCCAAATTACTC-3’，和

正向引物2：5’-GAAGGTGACCAAGTTCATGCTCAATATGCTACAAGCCAAATTACTT-3。

4.如权利要求1或2所述的KASP引物，其还包含选自以下任一种的反向引物：

5’-CCGGGCATGCCAACTATGGAAACAAC-3’；

5’-CAACTATGGAAACAACTCCATAATG-3’；和

5’-GAAACAACTCCATAATGCAAATC-3’。

5.用于鉴定番茄花叶病毒抗性基因的试剂盒，其包含权利要求1至4中任一项所述的KASP引物。

6.如权利要求5所述的试剂盒，其还包含：i)选自以下的两种标签序列：标签序列A：GAAGGTGACCAAGTTCATGCT，和标签序列B：GAAGGTCGGAGTCAACGGATT，并且所述两种标签序列分别与不同的荧光基团相连接；和ii)所述两种标签序列的互补序列，其分别与相同的淬灭基团相连接；

任选地，所述荧光基团分别为FAM荧光基团和HEX荧光基团，所述淬灭基团为BHQ淬灭基团。

7.如权利要求5或6所述的试剂盒，其还包含：扩增缓冲液、内参染料、dNTPs混合物、DNA聚合酶、MgCl₂以及ddH₂O。

8.如权利要求1至4中任一项所述的KASP引物，或者权利要求5至7中任一项所述的试剂盒，其用于：

i)鉴定番茄花叶病毒抗性基因Tm-2或Tm-2²；

ii)鉴定番茄是否含有番茄花叶病毒抗性基因Tm-2或Tm-2²；

iii)区分抗番茄花叶病毒番茄和感番茄花叶病毒番茄；

iv)区分纯合的抗番茄花叶病毒番茄和杂合的抗番茄花叶病毒番茄；

v)番茄育种；或者

vi)番茄花叶病毒病防控。

9.鉴定番茄是否含有番茄花叶病毒抗性基因的方法，其包括：

利用权利要求1至4中任一项的KASP引物或权利要求5至7中任一项所述的试剂盒来扩增待鉴定的番茄样品，并检测和分析扩增产物。

10.区分抗番茄花叶病毒番茄和感番茄花叶病毒番茄的方法，其包括：

利用权利要求1至4中任一项的KASP引物或权利要求5至7中任一项所述的试剂盒来扩增待鉴定的番茄样品，并检测和分析扩增产物。