[发明专利]一种测定富硒酵母中无机硒和有机硒含量的方法

说明书

本发明公开了一种测定富硒酵母中无机硒的含量的方法，包括以下步骤：(1)称取富硒酵母，向富硒酵母中加入强碱溶液，超声，使富硒酵母溶解，再进行水浴加热；其中，所述富硒酵母的质量与强碱溶液中氢氧根离子的物质的量的比为1g：15～35mmol；(2)加热完后，进行冷却，再离心，取上清液；(3)调节步骤(2)所得上清液的酸度至pH值为4～5，静置后过滤，得到滤液；(4)向步骤(3)所得滤液中加入6～12mol/L盐酸水溶液，煮沸后进行稀释，采用原子荧光光度计测定稀释所得溶液中的硒含量。本发明所述的测定无机硒的方法操作简单，精密度高，回收率好。

技术领域

本发明涉及一种测定硒含量的方法，尤其涉及一种测定富硒酵母中有机硒和无机硒含量的方法。

背景技术

硒具有抗氧化、抗肿瘤等多种生理功能，是动物的重要营养元素之一，广泛用于饲料添加剂中，硒的主要添加形式有无机亚硒酸钠盐和有机硒酵母，亚硒酸钠毒性高、不易被动物吸收利用，易造成浪费和环境污染，目前大多数地区已被禁止使用，而硒酵母由于其代谢周期长，生物利用率高，毒性低等特点。硒酵母中主要是以-2价存在的硒蛋白、核酸、多脂类的有机硒，和少量的亚硒酸钠、硒酸钠。因此，检测硒酵母中无机硒和有机硒的含量，在饲料安全使用中具有重要意义。

目前，硒酵母作为一种重要饲料添加剂，总硒的测定方法主要有二氨基联苯紫外分光光度法、原子荧光分光光度法、电感耦合等离子法，其中氢化物原子荧光光度法已引入国家标准法中；有机硒的测定方法目前还没有唯一标准，报道较多的主要有质谱-高效液相色谱法，衍生-高效液相色谱法，ICP-MS(Rajani Jagtap，2016)或HPLC-HG-AFS(王金荣，2013)等，但这些方法对仪器要求较高，试剂昂贵，一般实验室难以实现，操作繁琐，测试周期较长，且成本较高不适合广泛推广，此外，还有一些方法采用有机缓冲溶液浸提、透析分离的方法测定有机硒(高建忠，2006)，但这种方法耗时较长。

发明内容

本发明的目的在于克服现有技术的不足之处而提供一种测定时间短、简单且易于实施的测定富硒酵母中无机硒含量的方法。

本发明的另一目的在于提供一种测定富硒酵母中有机硒含量的方法。

为实现上述目的，本发明所采取的技术方案为：

一种测定富硒酵母中无机硒的含量的方法，包括以下步骤：

(1)称取富硒酵母，向富硒酵母中加入强碱溶液，超声，使富硒酵母溶解，再进行水浴加热；其中，所述富硒酵母的质量与强碱溶液中氢氧根离子的物质的量的比为1g：15～35mmol(即按照每克富硒酵母中加入15～35mmol强碱溶液的比例，向富硒酵母中加入强碱溶液；其中，强碱溶液中强碱的物质的量按强碱中氢氧根离子的物质的量计)；

(2)加热完后，进行冷却，再离心，取上清液；

(3)调节步骤(2)所得上清液的酸度，至上清液的pH值为4～5，静置后过滤，得到滤液；

(4)向步骤(3)所得滤液中加入6～12mol/L的盐酸水溶液，煮沸后进行稀释，采用原子荧光光度计测定稀释所得溶液中的无机硒的含量。

作为本发明所述测定富硒酵母中无机硒的含量的方法的优选实施方式，其中，在所述步骤(1)中，所述强碱溶液为氢氧化钠溶液、氢氧化钾溶液中的至少一种。更优选地，所述强碱溶液为氢氧化钠溶液。更优选地，所述氢氧化钠水溶液的浓度为0.15～0.35mol/L，更优选地，所述氢氧化钠水溶液的浓度为0.25mol/L。值得注意的是，氢氧化钠的浓度对硒酵母中无机硒的提取效果影响较大，经过大量的实验，发明人发现当氢氧化钠水溶液的浓度在0.15～0.35mol/L的范围内，都能取得较为理想的提取效果。