[发明专利]建立乳腺癌易感基因突变动物模型的方法及应用

权利要求书

1.一种建立乳腺癌易感基因突变动物模型的方法，其特征在于，包括如下步骤：

步骤一，构建与人CHEK2Y390C相对应的位点的相应动物的打靶载体，

步骤二，通过电转，将打靶载体转入ES细胞中；

步骤三，筛选正确同源重组的ES克隆，

步骤四，将ES进行囊胚注射，得到嵌合体动物，再经过繁育和纯化后获得可稳定遗传的Y390C动物模型。

2.如权利要求1所述的建立乳腺癌易感基因突变动物模型的方法，其特征在于：

步骤一中，与人CHEK2Y390C对应的小鼠位点为Y394C。

3.如权利要求1所述的建立乳腺癌易感基因突变动物模型的方法，其特征在于：

步骤二中，ES细胞为B6/BLU ES细胞系。

4.如权利要求1所述的建立乳腺癌易感基因突变动物模型的方法，其特征在于：

通过长片段PCR及Southern blot筛选出中靶克隆。

5.如权利要求4所述的建立乳腺癌易感基因突变动物模型的方法，其特征在于：

其中，所述长片段PCR的5’端引物是：

CHEK2-5F2:GAGGTCTGTTTCTTACCTGC

ES-1R3:AAGGGTTATTGAATATGATCGGA

所述长片段PCR的3’端引物是：

CHEK2-3R1:TCTGAAGAGATGAATGTGTG

ES-2F4:GCATCGCATTGTCTGAGTAGGTG。

6.如权利要求2所述的建立乳腺癌易感基因突变动物模型的方法，其特征在于：

步骤四中，囊胚注射后首先选取高嵌合率的嵌合体小鼠。

7.如权利要求6所述的建立乳腺癌易感基因突变动物模型的方法，其特征在于：

步骤四中，将嵌合体小鼠与B6小鼠进行繁育，得到的F1代小鼠用PCR测序鉴定基因型。

8.如权利要求7所述的建立乳腺癌易感基因突变动物模型的方法，其特征在于：

将KIn的杂合小鼠与全身表达Cre的品系交配，去除Neo得到KI模型；将KI/wt小鼠互配得到纯合子小鼠。

9.权利要求8中的纯合子小鼠在筛选乳腺癌药物中的应用。