[发明专利]一种a‑氰基丙烯酸酯细胞毒性检测方法

权利要求书

1.一种a-氰基丙烯酸酯细胞毒性检测方法，其特征在于，主要包括a-氰基丙烯酸酯胶粘剂生物相容性和细胞毒性体外实验、a-氰基丙烯酸酯胶粘剂生物相容性和细胞毒性动物实验以及聚丙烯补片应用a-氰基丙烯酸酯胶进行固定效果实验，其中a-氰基丙烯酸酯胶粘剂生物相容性和细胞毒性体外实验主要包括以下步骤：

（1）取真皮层成纤维细胞和间皮细胞进行培养基培养；

（2）在预定时间点（每月2日、4日、7日、10日、14日、21日、28日的0时、6时和24时）取步骤1中的样本进行依次进行洗涤、分散、再洗涤、离心；

取步骤2中的悬浊液并加入10ml的a-氰基丙烯酸酯胶和6ml 的PBS混合液后继续播种到培养基上并在37°C环境的密封内孵化5 h后进行进行染色处理，同时在显微镜下观察细胞形态，并对流式细胞术检测并计算细胞数，同时在a-氰基丙烯酸酯胶与PBS混合液混合时进行甲醛测定；

所述的细胞毒性动物实验主要包括以下步骤：

（1）取新西兰兔人为造成腹部缺陷，包括腹前壁(右和左侧面)内部和外部斜肌和横向肌肉，腹横筋以及腹膜壁层，并均分为观察组以及对照组；

（2）将观察组采用a-氰基丙烯酸酯胶粘剂处理固定，将对照组采用缝合处理；

（3）将观察组以及对照组的在培养14天后制作标本显微镜下观察模型部分细胞特征并对比；

所述聚丙烯补片应用a-氰基丙烯酸酯胶进行固定效果实验主要包括以下步骤：

（1）将需要缝合的患者均为为两组，一组为对照组，另一组为观察组；

（2）将观察组患者应用聚丙烯补片和a-氰基丙烯酸酯胶进行固定，将对照组患者应用聚丙烯补片和缝合的方式进行固定；

（3）对对照组与观察组的患者进行术后血液指标（白细胞、中性粒细胞）、生化指标（AST、ALT、BUN、Cr）以及术后随访并发症监测。

2.根据权利要求1所述的a-氰基丙烯酸酯细胞毒性检测方法，其特征在于，a-氰基丙烯酸酯胶粘剂生物相容性和细胞毒性体外实验中的甲醛测定主要在室温条件下并放在封闭的环境中，在预定时间点将50ul样本置于96孔板中，加入甲醛试剂进行孵育30分钟，同时在在535nm光照处测定甲醛的量。

3.根据权利要求1所述的a-氰基丙烯酸酯细胞毒性检测方法，其特征在于，a-氰基丙烯酸酯胶粘剂生物相容性和细胞毒性体外实验中的培养基包括低糖杜尔贝科培养基、10%的胎牛血清营养液、抗生素（10000U/ml的青霉素，10000ug/ml的链霉素和25ug/ml的两性霉素），且每3天更换新的培养液。

4.根据权利要求1所述的a-氰基丙烯酸酯细胞毒性检测方法，其特征在于，a-氰基丙烯酸酯胶粘剂生物相容性和细胞毒性体外实验中样本分离和计算主要是孵育完的待测溶液首先进行洗涤去培养液后，加入胰蛋白酶进行吹打分散，然后上离心机以1000r/min离心7分钟，加入2ml染色液后再进行离心，取悬浊液上流式机，细胞计算采用流式细胞术，最终计算出细胞水平，判定a-氰基丙烯酸酯是否具有细胞毒性。

5.根据权利要求1所述的a-氰基丙烯酸酯细胞毒性检测方法，其特征在于，聚丙烯补片应用a-氰基丙烯酸酯胶进行固定效果实验所选取患者不包括患有血液学、肝脏、肾脏疾病。