[发明专利]增强鲁米诺体系的电化学发光生物传感器的制备方法

权利要求书

1.增强鲁米诺体系的电化学发光生物传感器的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

1)确定待检测的目标miRNA，设计与其碱基互补的DNA探针序列；

2)玻碳电极的预处理：打磨玻碳电极，超声清洗，氮气吹干后将电极浸入5mM氯金酸溶液中，通过循环伏安法，初始电压和低电位设置为0V，高电位为1V，在此区间内循环扫描电沉积金纳米颗粒；

3)将DNA探针溶液滴加在电极表面，室温下于湿盒中自组装16-20h，带有巯基修饰的探针通过Au-S键固定到金纳米颗粒表面；

4)滴加葡萄糖氧化酶封闭电极表面非特异性活性位点，于4℃下培育3h；

5)将目标miRNA滴加到电极表面，室温下杂交30min，形成miRNA-DNA双链结构；

6)将血红素溶液滴加到杂交后的电极表面，室温下培育1h。

2.按照权利要求1的方法，其特征在于，设计的DNA探针自身不会杂交。

3.按照权利要求1的方法，其特征在于，所用玻碳电极的直径是3mm，打磨粉为0.05μm Al₂O₃粉末。

4.按照权利要求1的方法，其特征在于，电沉积过程中的扫速为50mV/s，扫描圈数为5圈。

5.按照权利要求1的方法，其特征在于，滴加的DNA探针溶液由PBS缓冲液配置，浓度为25μM，体积为10μL；PBS缓冲液浓度为5mM，PBS的pH＝7.4，

6.按照权利要求1的方法，其特征在于，滴加的葡萄糖氧化酶浓度为0.5mg/mL，体积为10μL。

7.按照权利要求1的方法，其特征在于，滴加的血红素溶液浓度为10μM，体积为10μL。