[发明专利]一种特异性DNA甲基化谱其建立方法及应用

权利要求书

1.一种特异性DNA甲基化谱，其特征在于，包括TIMP-1、ACAT1、ABCA1三个基因，其核苷酸序列如SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3所示。

2.一种特异性DNA甲基化谱的建立方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)筛选与动脉粥样硬化相关的候选基因；

(2)筛选动脉粥样硬化患者和与之匹配的正常人的血液标本,检测血脂水平并提取血液中单个核细胞的DNA,确定DNA的纯度和浓度；

(3)将提取的DNA进行重亚硫酸盐修饰,用巢氏降落式甲基化特异性PCR检测ABCA1、ACAT1、PPARα、PDGFβ、5-LO、LRP1、LCAT、TIMP-1、MMP-9、ICAM-1、VEGF、NFκB 12个基因的启动子区CpG岛甲基化的改变；

(4)提取血液中单个核细胞的RNA并将其逆转录成cDNA,荧光Real-Time PCR法测血液单个核细胞中ABCA1、ACAT1、PPARα、5-LO、TIMP-1基因mRNA的表达；

(5)建立由ABCA1、ACAT1、TIMP-1三基因组成的动脉粥样硬化特异性DNA甲基化谱；

(6)分析比较多个基因甲基化改变与颈动脉多普勒超声相比诊断动脉粥样硬化的特异性、敏感性等指标并进行评价。

3.根据权利要求2所述的特异性DNA甲基化谱的建立方法，其特征在于，动脉粥样硬化患者血液中单个核细胞中ACAT1、PPARα基因DNA启动区甲基化程度降低，而ABCA1、TIMP-1、5-LO基因DNA启动子区甲基化程度升高。

4.根据权利要求2所述的特异性DNA甲基化谱的建立方法，其特征在于，动脉粥样硬化患者血液中单个核细胞中ACAT1、PPARα基因mRNA表达减少，而ABCA1、TIMP-1、5-LO基因mRNA表达增加。

5.根据权利要求2所述的特异性DNA甲基化谱的建立方法，其特征在于，ABCA1、ACAT1、TIMP-1三个基因联合组成的谱特异性和灵敏度均与影像学诊断的结果一致。

6.权利要求1所述特异性DNA甲基化谱在动脉粥样硬化性疾病早期诊断过程中的应用。