[发明专利]一种具诱导血管化能力的抗菌脱细胞真皮敷料及其制备方法

说明书

技术领域

本发明属于生物医学工程技术领域，特别是皮肤创伤敷料制备技术领域，公开了一种具诱导血管化能力的抗菌脱细胞真皮敷料及其制备方法。

背景技术

随着对皮肤损伤治疗研究的进展，组织工程皮肤是近年来研究的热点，有着广阔的临床应用前景。皮肤在面临大面积烧伤或损坏时急需获得大量的表皮覆盖以促进皮肤组织的再生与修复。脱细胞真皮基质具有作为理想的皮肤修复材料的诸多优点：（1）价格便宜，来源广泛；（2）有良好的组织相容性，本身无毒、抗原性低；（3）可降解性，材料在降解过程中逐渐被吸收并保持稳定的体积；（4）维持生长其上的细胞形态，促进细胞黏附和生长；（5）具有一定的孔隙率；（6）具有一定的机械强度和韧性，适合加工裁剪。但由于脱细胞真皮基质是一种无活性的支架材料，在使用中血管化能力低特别是异种脱细胞真皮基质，在临床应用中遇到的另一个问题是如何解决大块组织或器官植入体内的营养来源，很显然，在没有血供的情况下要实现大量活细胞在体内的存活是不可能的，如何解决脱细胞真皮基质在应用中血管化能力不足的问题，是突破脱细胞真皮基质在临床应用推广瓶颈的关键。此外，脱细胞真皮基质没有抗菌能力，作为敷料使用时容易受细菌感染而导致创面感染，又具有交叉感染的危险性等缺点，也限制了其作为敷料在临床上的应用。

血管内皮生长因子(VEGF)可促进血管内皮细胞分裂与增殖，增加微静脉、小静脉的通透性，诱导丝氨酸蛋白酶和间质胶原酶的表达，使细胞质钙聚集，诱导血管生成，在创伤愈合中起着重要的作用。基膜的降解对内皮细胞迁移非常必要, 并且是病理性血管增生启动的关键环节。VEGF能诱导MMP的表达, MMP对 VEGF诱导内皮细胞迁移起必要作用。 此外VEGF可促进纤溶酶原激活剂及其蛋白质分解酶的释放, 从而降解毛细血管基底膜, 有利于受其刺激而增生内皮细胞迁移和趋化, 诱使汇聚的微血管内皮细胞 侵入纤维凝胶, 形成管样结构或已存在的血管以发芽形式形成 新生血管。此外，VEGF能促进内皮细胞增殖的信号通路和内皮细胞存活作用与抗凋亡作用的信号通路。

抗菌肽LL-37是cathelicidin肽Hcap-18的C末端切割产物，能直接杀死细菌、真菌和病毒。抗菌肽LL-37广谱抗菌，对细菌、真菌、病毒、支原体均有抑制作用。尤其可以抑制创伤常见的感染菌种，如甲类链球菌 (Group A Streptococcus)、表皮葡萄球菌(Staphylococcus epidermidis)、金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)、绿脓杆菌 (Pseudomonas aeruginosa)、大肠杆菌(Escherichia coli)、肺炎克雷伯菌(Klebsiella pneumoniae)，其最小抑菌浓度( MIC) 分 别为 16、1. 5、6. 5、3. 2、6. 5、0. 8 μmol/L。除了直接的杀菌作用，抗菌肽LL-37还抑制细菌产生的内毒素和CD14阳性细胞结合，有助于改善脓毒血症，减少感染造成的死亡。此外，抗菌肽LL-37还通过趋化免疫细胞、调节炎性促进因子/抑制因子的分泌、协调天然免疫和获得性免疫等功能，发挥免疫调节作用。抗菌肽LL-37还可作用于血管内皮细胞和上皮细胞，刺激血管生成和促进损伤修复。

发明内容

本发明的目的在于针对现有的脱细胞真皮基质敷料的血管化能力低，诱导修复能力差，且不具备抗菌性能，提供一种具诱导血管化能力的抗菌脱细胞真皮敷料及其制备方法。本发明通过以猪源性脱细胞真皮敷料为基质，通过聚多巴胺表面修饰后将血管内皮生长因子（VEGF）和抗菌肽LL-37固定在其表面制备出一种具诱导血管化能力的抗菌脱细胞真皮敷料。该脱细胞真皮敷料免疫原性低，材料来源丰富，具有良好的生物相容性和抗菌性能，且具有良好的血管化能力。

为实现上述目的，本发明的技术方案为一种具诱导血管化能力的抗菌脱细胞真皮敷料由脱细胞真皮基质、血管内皮生长因子（VEGF）和抗菌肽LL37。

进一步的，所述的脱细胞真皮敷料按重量份数计由脱细胞真皮基质10份、聚多巴胺0.25-0.5份、血管内皮生长因子0.01-0.05份、抗菌肽LL37 0.1-0.5组成。

优选的，所述的血管内皮生长因子（VEGF），抗菌肽LL37均购自美国Thermo Fisher Scientifi公司。

为实现上述目的，本发明的另一技术方案为：一种具诱导血管化能力的抗菌脱细胞真皮敷料的制备方法，所述的制备方法通过以下步骤实现：（1）脱细胞真皮基质聚多巴胺表面修饰、（2）血管内皮生长因子（VEGF）的固定、（3）抗菌肽LL37的固定。