[发明专利]一种鉴别猪流行性腹泻病毒疫苗弱毒株和/或流行毒株一步法RT‑PCR诊断试剂盒在审
| 申请号： | 201710018128.4 | 申请日： | 2017-01-11 |
| 公开（公告）号： | CN106834538A | 公开（公告）日： | 2017-06-13 |
| 发明（设计）人： | 于新友;李峰;李天芝;沈志强;吴家强;孙文博 | 申请（专利权）人： | 山东省滨州畜牧兽医研究院 |
| 主分类号： | C12Q1/70 | 分类号： | C12Q1/70;C12Q1/68;C12R1/93 |
| 代理公司： | 济南舜源专利事务所有限公司37205 | 代理人： | 许静 |
| 地址： | 256600 山东*** | 国省代码： | 山东;37 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 鉴别 流行性 腹泻 病毒 疫苗 弱毒株 流行 一步法 rt pcr 诊断 试剂盒 | ||
1.一种鉴别猪流行性腹泻病毒疫苗弱毒株和/或流行毒株一步法RT-PCR诊断试剂盒，其特征在于：其包括20μL RT-PCR一步法酶、250μL酶缓冲液、300μL Rnase Freed H2O、40μL混合引物、20μL 阳性对照、20μL阴性对照、80μL DL2000及25μL 6×Loading Buffer，所述混合引物包括上游引物P1：5'-AGTCTGCCAACTTGTCTT-3'，下游引物P2：5'-AGTAAAAGCAGACTAAACAAAGCCT-3'。
2.根据权利要求1所述的一种鉴别猪流行性腹泻病毒疫苗弱毒株和/或流行毒株一步法RT-PCR诊断试剂盒，其特征在于：所述阴性对照为灭菌的DEPC水。
3.根据权利要求1所述的一种鉴别猪流行性腹泻病毒疫苗弱毒株和/或流行毒株一步法RT-PCR诊断试剂盒，其特征在于：所述阳性对照为猪流行性腹泻病毒疫苗弱毒株和流行毒株RNA。
4.根据权利要求1所述的一种鉴别猪流行性腹泻病毒疫苗弱毒株和/或流行毒株一步法RT-PCR诊断试剂盒，其特征在于：所述混合引物中各条引物的浓度均为15μmo1/L。
5.根据权利要求1所述的一种鉴别猪流行性腹泻病毒疫苗弱毒株和/或流行毒株一步法RT-PCR诊断试剂盒，其特征在于：所述的RT-PCR一步法酶由PrimeScript Rtase、DNA Polymerase和RNase Inhibitor组成，所述PrimeScript Rtase、DNA Polymerase和RNase Inhibitor的体积比为1:1:1。
6.根据权利要求1所述的一种鉴别猪流行性腹泻病毒疫苗弱毒株和/或流行毒株一步法RT-PCR诊断试剂盒，其特征在于：所述的酶缓冲液由dNTP Mixture和One Step Enhancer Solution组成，所述dNTP Mixture的浓度为400μmo1/L。
7.根据权利要求1所述的一种鉴别猪流行性腹泻病毒疫苗弱毒株和/或流行毒株一步法RT-PCR诊断试剂盒，其特征在于：所述RT-PCR反应体系为：反应在25 μL体系中进行，P1、P2引物各1μL，PrimeScript 1 step Enzyme Mix 1μL，2×1 step Buffer 12.5μL、两种病毒RNA混合物各0.5μL，加RNase Freed H2O至25μL。
8.根据权利要求7所述的一种鉴别猪流行性腹泻病毒疫苗弱毒株和/或流行毒株一步法RT-PCR诊断试剂盒，其特征在于：所述RT-PCR扩增反应条件为：50℃ 20 min；95℃ 3 min；94℃ 20s；退火温度 52℃ 20s；72℃ 20s；40个循环；最后72℃延伸10 min。
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