[发明专利]一种草酸脱羧酶的制备方法及应用有效
| 申请号： | 201710015055.3 | 申请日： | 2017-01-09 |
| 公开（公告）号： | CN106939315B | 公开（公告）日： | 2020-09-18 |
| 发明（设计）人： | 汪小锋;汪卫;吴玉峰;宋保平 | 申请（专利权）人： | 武汉康复得生物科技股份有限公司 |
| 主分类号： | C12N15/60 | 分类号： | C12N15/60;C12N15/75;C12N9/88 |
| 代理公司： | 北京汇泽知识产权代理有限公司 11228 | 代理人： | 程殿军;张瑾 |
| 地址： | 430050 湖北省武汉市东湖*** | 国省代码： | 湖北;42 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 草酸 脱羧酶 制备 方法 应用 | ||
1.一种高效生产真菌来源的重组草酸脱羧酶表达载体，其特征在于，包括含有酸诱导启动子、分泌信号肽、去原始信号肽的草酸脱羧酶基因和trpA终止子的表达质粒，其中，所述酸诱导启动子是在指pH值为1.5～4.5的条件下，能在芽孢杆菌(Bacillus)中启动基因表达的启动子，所述分泌信号肽是指在芽孢杆菌(Bacillus)中能促进真菌来源的草酸脱羧酶基因分泌表达信号肽序列；
所述酸诱导启动子的序列如SEQ ID NO.6所示，所述分泌信号肽的序列如SEQ ID NO.7所示，所述去原始信号肽的草酸脱羧酶基因的序列如SEQ ID NO.1～SEQ ID NO.5任一所述的序列，所述trpA终止子的序列如SEQ ID NO.8所示。
2.一种草酸脱羧酶的制备方法，其特征在于，将如权利要求1所述的重组草酸脱羧酶表达载体转化到pH≤4.5下正常生长的耐酸性的芽孢杆菌中，制备草酸脱羧酶重组菌，在发酵培养基中培养该重组菌，培养重组菌至OD600达到0.8～3.0后，并补加酸至pH值为3.0～4.5进行草酸脱羧酶的诱导表达，诱导表达结束后通过离心收集上清，调节该上清的pH值和硫酸铵沉淀实现重组草酸脱羧酶的初步纯化。
3.如权利要求2所述的制备方法，其特征在于，所述耐酸性的芽孢杆菌(Bacillus)为环状芽孢杆菌(Bacillus circulans)、嗜热脂肪地芽孢杆菌(Geobacillusstearothermophilus)或解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)。
4.如权利要求2所述所述的制备方法，其特征在于，所述补加酸时所用的酸为盐酸、磷酸、硫酸、草酸/草酸盐、乙酸、丙二酸、丁二酸、柠檬酸或植酸。
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