[发明专利]人源化基因编辑哺乳动物的制备方法及其用途

说明书

技术领域

本发明涉及人源化基因编辑技术，尤其涉及一种表达人血清白蛋白的人源化基因编辑哺乳动物的制备方法及其用途。

背景技术

人血清白蛋白(Human serumalbumin，HSA)，是由肝脏合成的单链、非糖基化蛋白质，在体内起着维持血浆胶体渗透压、营养运输、抗凝血、清除自由基等许多重要作用。HAS在临床中具有治疗烧伤、失血引起的休克,防治低蛋白血症及肝硬化或肾病引起的水肿或腹水等多种用途，此外HSA还能作为许多宿主细胞和工程细胞株的培养基成分以及生物制品的稳定剂。HSA的来源主要依赖于人类原料血浆。近年来，基因工程为HSA的制备一种具有吸引力的解决方法。虽然世界上许多实验室及公司为了从细菌、酵母、植物和转基因动物的乳腺产生出重组HSA(rHSA)进行了大量的研究，然而迄今仍很少能够在用于大规模生产时具有成本效益。

发明内容

本文中的实施例涉及一种人源化基因编辑哺乳动物的制备方法，其包含一种利用基因靶向修饰技术将动物内源性白蛋白基因编码序列靶向替换为修饰的编码人血清白蛋白的多聚核糖核酸。例如，修饰的编码人血清白蛋白的多聚核糖核酸人为连接到动物内源基因启动子多聚核糖核酸序列下游。在一些实施例中，人源化基因编辑哺乳动物并不表达全部的或部分的动物内源性白蛋白，并且所述编码人白蛋白的多聚核糖核酸也包括任何修饰后的人白蛋白编码基因序列。

本发明的一些实施例还涉及一种从人源化基因编辑哺乳动物中产生人血清白蛋白的方法。在一些实施例中，所述方法可包括制备人源化基因编辑哺乳动物，所述人源化基因编辑哺乳动物的基因组包括编码人血清白蛋白的多聚核糖核酸。在一些实施例中，所述多聚核糖核酸可操作地连接到启动子多聚核糖核酸。在一些实施例中，人源化基因编辑哺乳动物并不表达全部的或部分的编码非人哺乳动物的内源性白蛋白的多聚核糖核酸，并且所述编码人血清白蛋白的多聚核糖核酸包括所以人血清白蛋白基因的修饰类型。所述方法可进一步包括：获得源自非人哺乳动物的血液样品，并且从所述血液样品中分离出所述人血清白蛋白。

本发明的一些实施例还涉及一种制备人源化基因编辑哺乳动物的方法。在一些实施例中，所述方法可包括：提供编码人血清白蛋白的多聚核糖核酸，并且将所述编码人血清白蛋白的多聚核糖核酸引入至该非人哺乳动物的基因组，从而制备非人哺乳动物。在一些实施例中，所述编码人血清白蛋白的多聚核糖核酸可包括人血清白蛋白基因的修饰，并且所述人源化基因编辑哺乳动物并不表达全部的或部分的编码人源化基因编辑哺乳动物的内源性白蛋白的多聚核糖核酸。在某些实施例中，所述方法可进一步包括：将所述编码人血清白蛋白的多聚核糖核酸引入至分离自非人哺乳动物的体细胞中，所述非人哺乳动物的基因组包括所述编码人血清白蛋白的多聚核糖核酸，将引入的体细胞的细胞核融入至非人哺乳动物的无核的卵母细胞内，从而产生该非人哺乳动物的胚胎，并且将胚胎植入一个养育的雌性非人哺乳动物，从而产生非人哺乳动物。

本发明的一些实施例还涉及一种将非人供体组织移植到受体哺乳动物中的方法。所述方法可包括将供体组织移植到受体哺乳动物。在一些实施例中，所述非人供体组织获取自人源化基因编辑哺乳动物，所述人源化基因编辑哺乳动物并不表达全部的或部分的编码人源化基因编辑哺乳动物的内源性白蛋白的多聚核糖核酸，并且所述编码人血清白蛋白的多聚核糖核酸可包括人血清白蛋白基因的修饰。在某些实施例中，所述非人供体组织是肝脏。

在一些实施例中，所述修饰可包括优化的人血清白蛋白基因密码子和/或所述编码人血清白蛋白的多聚核糖核酸可包括乳腺白蛋白基因的一个或多个内含子。

在一些实施例中，所述修饰可包括用非人类乳腺细胞优选的密码子替换80％或更少的人类密码子。

在一些实施例中，所述编码人血清白蛋白的多聚核糖核酸可包括人血清白蛋白基因或非人类血清白蛋白基因的内含子1和内含子2的至少一部分。

在一些实施例中，人源化基因编辑哺乳动物的血液可包括约8至30g/L的人血清白蛋白，通过使用BCG(溴甲酚绿)白蛋白检测所测定。

在一些实施例中，转基因猪的血液可包括不低于16g/L的人血清白蛋白，通过使用BCG(溴甲酚绿)白蛋白检测所测定，并且其中所述的人源化基因编辑哺乳动物不表达全部的编码人源化基因编辑哺乳动物的内源性白蛋白的多聚核糖核酸。