[发明专利]一种树突细胞靶向的pH响应型DNA疫苗递送系统及制备方法

权利要求书

1.一种树突细胞靶向的pH响应型DNA疫苗递送系统，其特征在于，它是由DSPE-G2与DNA复合形成的正电性纳米粒作为层层自组装的内核，在其表面依次覆盖电荷反转层PAH-Cit和靶向层MCS。

2.根据权利要求1所述的一种树突细胞靶向的pH响应型DNA疫苗递送系统，其特征在于，所述的DSPE-G2的结构为：

3.根据权利要求1所述的一种树突细胞靶向的pH响应型DNA疫苗递送系统，其特征在于，所述的电荷反转层PAH-Cit在酸性条件下酯键断裂，脱去柠康酰支链，形成阳离子聚电解质聚丙烯胺。

4.根据权利要求1所述的一种树突细胞靶向的pH响应型DNA疫苗递送系统，其特征在于，所述的外层MCS具有靶向树突细胞表面甘露糖受体功能，进而促进受体介导的内吞作用。

5.一种树突细胞靶向的pH响应型DNA疫苗递送系统的制备方法，其特征在于所述方法步骤如下：

a、DNA载体的制备：将2mg DSPE-G2溶于100μL氯仿/甲醇(v/v＝4∶1)中，注入1mL快速搅拌中的HEPES缓冲液(10mM，pH 7.4)中，持续搅拌6h除去有机溶剂。

b、二元复合物的制备：将pDNA溶于HEPES缓冲液(10mM，pH 7.4)中，调整浓度为0.2mg/mL。将pDNA溶液与浓度为0.1-2mg/mL的DSPE-G2溶液等体积混合，涡旋1min，室温孵化20min。

c、三元复合物的制备：将PAH-Cit溶于HEPES缓冲液(10mM，pH 7.4)中，调整浓度为1mg/mL、2mg/mL。取50-200μL PAH-Cit溶液与100μL二元复合物溶液混合，室温孵化30min。

d、四元复合物的制备：将MCS溶于1％(v/v)醋酸溶液，静置过夜，用1M NaOH调节pH＝5.5，过0.8μm滤膜，调整浓度为0.5mg/mL。取150-300μL三元复合物溶液逐滴加入300μL搅拌中的MCS溶液，持续搅拌30min。

6.根据权利要求6所述的一种树突细胞靶向的pH响应型DNA疫苗递送系统的制备方法，其特征在于所述步骤b中，DSPE-G2与pDNA复合的N/P比＝20。

7.根据权利要求6所述的一种树突细胞靶向的pH响应型DNA疫苗递送系统的制备方法，其特征在于所述步骤c中，DSPE-G2与PAH-Cit的浓度比为1∶1，质量比为1∶1。

8.根据权利要求6所述的一种树突细胞靶向的pH响应型DNA疫苗递送系统的制备方法，其特征在于所述步骤d中，PAH-Cit与MCS的浓度比为4∶1，质量比为2∶3。