[发明专利]一种病毒感染的免疫学快速检测试剂盒及检测方法

说明书

技术领域

本发明属于生物工程技术领域，具体地说，涉及一种病毒感染的免疫学快速检测试剂盒及检测方法。

背景技术

病毒是一类个体微小、无完整细胞结构、含单一核酸(DNA或RNA)型、必须在活细胞内寄生并复制的非细胞型微生物，它主要由核酸和蛋白质外壳组成。病毒性感染疾病是一类严重威胁人类健康的疾病。病毒的检测方法多种多样，病毒感染的检测方法有：病毒的分离培养技术、免疫学方法、分子生物学方法、流式细胞术。目前常用的分子生物学检测技术主要有核酸分子杂交技术、聚合酶链反应、基因芯片技术等。常用的免疫学检测技术主要有酶联免疫吸附试验、免疫荧光技术、放射免疫技术、化学发光免疫分析技术、电化学免疫分析技术、表面等离子体共振免疫分析技术、蛋白质芯片等。这些病毒的检测方法各有所长，但均存在一定的局限性，如敏感性不高、操作繁琐、周期长、费用高等问题，迫切需要开发研制一种快速、简便、灵敏、准确、经济的病毒感染检测技术。在临床上建立一种确实有效且快速的诊断方法越来越受到医学界的关注。

发明内容

有鉴于此，本发明针对上述的问题，提供了一种病毒感染的免疫学快速检测试剂盒及检测方法，本发明利用免疫学检测技术快速诊断病毒感染，且检测结果特异性高、敏感性强、肉眼易判断，适合于现场快速检测。

为了解决上述技术问题，本发明公开了一种病毒感染的免疫学快速检测试剂盒，该试剂盒的组成如下：

其中，水化溶液含10g/L牛血清白蛋白，100mL/L甘油，250mg/L THYRESFUS-Anti-V MoAb结合物的PBS液。

进一步地，THYRESFUS-Anti-V MoAb结合物通过以下方法制备得到：

(1)用0.05mol/LPH9.5碳酸盐缓冲液将25％戊二醛稀释至5％；

(2)取1mg/mL病毒单克隆抗体0.5mL，加0.5ml 5％戊二醛，37℃水浴结合2h；

(3)加入220.0g/L NaCl 0.1ml充分混匀后，置4℃10min预冷；

(4)加冷无水乙醇2.4ml，颠倒混合，立即1000r/min离心10min；

(5)弃上清，沉淀用冷80％乙醇洗一次，将离心管倒置，控干；

(6)加入0.05mo l/LPH9.5碳酸盐缓冲液0.5ml溶解沉淀物；

(7)将150μgTHYRESFUS溶于0.5ml 0.15mol/L NaCl，再与醛化病毒单克隆抗体溶液混合；

(8)加入1.0mol/LpH9.5新型生物感应显色物质，调节pH值至9.0-9.5；

(9)于4℃，电磁搅拌下结合24h；

(10)加入0.1ml 0.2mol/L赖氨酸，以封闭残留的醛基，终止反应；

(11)4℃放置2h；

(12)将反应物通过Sephadex G-200凝胶柱，用PBS洗脱，收集第一洗脱峰；或将反应物装入透析袋，对0.01mol/L pH7.2PBS，4℃透析过夜并收集；浓缩收集液即为THYRESFUS-Anti-V MoAb结合物，用PBS调节THYRESFUS-Anti-V MoAb至浓度250mg/L，并加入终浓度10g/L牛血清白蛋白，100mL/L甘油，得到水化溶液。

进一步地，阳性病毒血清是经自制的病毒双抗夹心ELISA试剂盒检测为阳性的血清。

进一步地，阴性病毒血清是经自制的病毒双抗夹心ELISA试剂盒检测为阴性的血清。

进一步地，自制的病毒双抗夹心ELISA试剂盒的制备及检测方法如下：20μg/mL病毒单克隆抗体包被ELISA反应板，37℃保温2h，洗板3次，加含1％牛血清白蛋白的PBS封闭液37℃，3h，PBS洗2次；加入1∶100稀释的待检血清100μL，37℃保温30分，洗板3次；加入效价为1∶1000的病毒兔抗体100μL，37℃保温30分，洗板3次；加入效价为1∶1000的HRP标记羊抗兔抗体100μL，37℃保温30分，洗板3次；TMB-H₂O₂显色，目测和仪器判断结果。

进一步地，病毒为麻疹病毒或巨细胞病毒。

本发明还公开了一种病毒感染的免疫学快速检测方法，采用上述的病毒感染的免疫学快速检测试剂盒，包括以下步骤：