[发明专利]一种病毒感染的免疫学快速检测试剂盒及检测方法

权利要求书

1.一种病毒感染的免疫学快速检测试剂盒，其特征在于，该试剂盒的组成如下：

其中，水化溶液含10g/L牛血清白蛋白，100mL/L甘油，250mg/L THYRESFUS-Anti-V MoAb结合物的PBS液。

2.根据权利要求1所述的病毒感染的免疫学快速检测试剂盒，其特征在于，所述THYRESFUS-Anti-V MoAb结合物通过以下方法制备得到：

(1)用0.05mol/LPH9.5碳酸盐缓冲液将25％戊二醛稀释至5％；

(2)取1mg/mL病毒单克隆抗体0.5mL，加0.5ml 5％戊二醛，37℃水浴结合2h；

(3)加入220.0g/L NaCl 0.1ml充分混匀后，置4℃10min预冷；

(4)加冷无水乙醇2.4ml，颠倒混合，立即1000r/min离心10min；

(5)弃上清，沉淀用冷80％乙醇洗一次，将离心管倒置，控干；

(6)加入0.05mol/LPH9.5碳酸盐缓冲液0.5ml溶解沉淀物；

(7)将150μg THYRESFUS溶于0.5ml 0.15mol/L NaCl，再与醛化病毒单克隆抗体溶液混合；

(8)加入1.0mol/LpH9.5新型生物感应显色物质，调节pH值至9.0-9.5；

(9)于4℃，电磁搅拌下结合24h；

(10)加入0.1ml 0.2mol/L赖氨酸，以封闭残留的醛基，终止反应；

(11)4℃放置2h；

(12)将反应物通过Sephadex G-200凝胶柱，用PBS洗脱，收集第一洗脱峰；或将反应物装入透析袋，对0.01mol/L pH7.2PBS，4℃透析过夜并收集；浓缩收集液即为THYRESFUS-Anti-V MoAb结合物，用PBS调节THYRESFUS-Anti-V MoAb至浓度250mg/L，并加入终浓度10g/L牛血清白蛋白，100mL/L甘油，得到水化溶液。

3.根据权利要求1所述的病毒感染的免疫学快速检测试剂盒，其特征在于，所述阳性病毒血清是经自制的病毒双抗夹心ELISA试剂盒检测为阳性的血清。

4.根据权利要求1所述的病毒感染的免疫学快速检测试剂盒，其特征在于，所述阴性病毒血清是经自制的病毒双抗夹心ELISA试剂盒检测为阴性的血清。

5.根据权利要求3或4所述的病毒感染的免疫学快速检测试剂盒，其特征在于，所述自制的病毒双抗夹心ELISA试剂盒的制备及检测方法如下：20μg/mL病毒单克隆抗体包被ELISA反应板，37℃保温2h，洗板3次，加含1％牛血清白蛋白的PBS封闭液37℃，3h，PBS洗2次；加入1∶100稀释的待检血清100μL，37℃保温30分，洗板3次；加入效价为1∶1000的病毒兔抗体100μL，37℃保温30分，洗板3次；加入效价为1∶1000的HRP标记羊抗兔抗体100μL，37℃保温30分，洗板3次；TMB-H2O2显色，目测和仪器判断结果。

6.根据权利要求5所述的病毒感染的免疫学快速检测试剂盒，其特征在于，所述病毒为麻疹病毒或巨细胞病毒。

7.一种病毒感染的免疫学快速检测方法，其特征在于，采用权利要求1至6中任一权利要求所述的病毒感染的免疫学快速检测试剂盒，包括以下步骤：

1)反应：取一洁净的载玻片上，分别标记为阳性对照孔、测试孔和阴性对照孔，在每孔用移液枪加入12μL的水化溶液，往阳性对照孔中加入3μL阳性病毒血清，而往测试孔中加入3μL待测血清，阴性对照孔加3μL阴性病毒血清，迅速混匀；将载玻片放入一湿盒内，将湿盒放入37℃保温箱反应30分钟；

2)结果判断：37℃反应30分钟后，立刻取出湿盒；以一张白纸或白色泡沫盒为背景，通过反应溶液颜色的变化，即判断检测结果；如果溶液为无色，则说明病毒感染阴性；如果为红色，则说明病毒感染阳性。