[发明专利]一种单纯疱疹病毒II型IgM抗体的免疫层析检测试剂盒

说明书

技术领域

本发明属于生物医药领域，具体涉及一种单纯疱疹病毒II型IgM抗体的免疫层析检测试剂盒。

背景技术

单纯疱疹病毒(Herpes Simplex Virus,HSV)属于人类疱疹病毒α亚科，是DNA双链病毒，人类是其唯一自然宿主。根据其抗原性质的不同，可分为单纯疱疹病毒I型(HSV-1型)型和单纯疱疹病毒II型(HSV-2型)，两者之间的基因同源序列约为50％。HSV-1型多感染口、面、眼等腰部以上部位，而HSV-2型则通常感染生殖器及肛周等腰以下部位。疱疹的典型临床表现出皮肤粘膜上出现集簇性水疱、脓疱。溃疡和结痂。

HSV-2型是引起生殖器疱疹最常见的原因，生殖器疱疹已经成为感染率最高的性传播感染之一。孕妇感染单纯疱疹病毒易引起胎儿畸形或分娩后婴儿出现疱疹病毒性脑炎等而严重致残疾病。近年来生殖器疱疹尤其是复发性生殖器的患病率无论在发达国家或是发展中国家均明显增加。80％以上的HSV-2型感染者并不表现出生殖器疱疹症状，或没有显著症状，不易被发现，但仍能间歇性的排毒，在不易察觉的情况下传染给别人。单纯疱疹病毒的特异性抗体和非特异性抗体均在感染后的最初几周内出现，因此，HSV-2型特异性IgM抗体的检测对于隐形感染和流行病学调查具有重要作用。

目前，单纯疱疹病毒的实验室诊断方法有细胞培养、抗原检测、PCR、血清抗体检测等。细胞培养及PCR方法对实验场地等实验条件及人员的要求较高，均不能在大部分的实验室开展。检测抗原的直接免疫荧光或ELISA方法均需依赖相应的仪器设备，而且试剂多为进口，价格昂贵。血清抗体检测如常用的胶体金免疫层析法，其特异性强、灵敏度高、操作简捷等优点而并广泛应用，但是胶体金免疫层析法受环境和人为因素的影响较大，如当环境温度较低时(如冬季)，层析速度慢，需延长反应时间，否则容易造成漏检；或放置于空气中过长时间，导致受潮，或当环境湿度过高，膜上毛细作用加强，点膜容易引起T线、C线变宽甚至扩散，影响检测过程和结果。因此，需对胶体金免疫层析法检测HSV-2型特异性IgM抗体的试剂盒进行优化，以得到一种受环境因素影响小、检测稳定性高的单纯疱疹病毒II型免疫层析检测试剂盒。

发明内容

为了解决现有技术中存在的问题(如胶体金免疫层析法受环境因素影响大，导致灵敏度和稳定性下降等)，本发明提供了一种单纯疱疹病毒II型IgM抗体的免疫层析检测试剂盒，该试剂盒可显著降低环境因素对检测过程和结果的影响，保障检测结果的灵敏度、准确度和稳定性。

本发明提供的一种单纯疱疹病毒II型IgM抗体的免疫层析检测试剂盒，所述试剂盒由试剂条和塑料卡组装而成，所述试剂条包括底板，所述底板上粘贴有带有检测线(T)和质控线(C)的反应膜，所述反应膜靠近检测线(T)的一端依次叠加粘贴有胶体金垫、样品垫，所述反应膜靠近质控线(C)的一端叠加粘贴有吸收垫，所述反应膜上检测线(T)包被了单纯疱疹病毒II型抗原，所述反应膜上质控线(C)包被了羊抗鼠IgG抗体，所述胶体金垫上包被了胶体金标记的鼠抗人IgM单克隆抗体。

在本发明试剂盒中，所述反应膜由以下方法制得：用缓冲液将单纯疱疹病毒II型抗原稀释至包被浓度为0.8～1.2mg/ml，将羊抗鼠IgG抗体稀释至包被浓度为1.5～1.8mg/ml，在反应膜上分别划线单纯疱疹病毒II型抗原检测线和羊抗鼠IgG抗体质控线，划线后将反应膜置于干燥间，温度20～25℃，湿度小于30％，干燥4～5小时；

所述胶体金垫由以下方法制得：以氯金酸-柠檬酸三钠还原法制备直径为20nm的胶体金溶液，制备完成后取100ml胶体金液放在烧杯内，用0.2M K₂CO₃调至pH8.0，按100ml胶体金溶液加入2.0mg鼠抗人IgM单克隆抗体，再缓慢添加0.2M K₂CO₃将胶体金溶液调至pH9.5，添加K₂CO₃的时间为5分钟，然后室温搅拌30分钟，加入终浓度为10mg/ml牛血清白蛋白，1mg/ml聚乙烯吡咯烷酮封闭20～30分钟，12000r/m离心30分钟，弃上清，用缓冲液复溶至50ml，按1ml溶液铺20cm²的比例均匀地铺在玻璃纤维膜上，再置于干燥间，温度20～25℃，湿度小于30％，干燥4～5小时。