[发明专利]微量细胞水平鉴别单原核胚胎类型的方法和系统

权利要求书

1.一种微量细胞水平鉴别单原核胚胎类型的方法，其特征在于，包括以下步骤：

将单原核胚胎样本体外培养至囊胚，取所述囊胚滋养层消化成单细胞，收集微量所述单细胞进行全基因组扩增，得到第一扩增产物；

将所述第一扩增产物与SNP基因芯片杂交，扫描杂交后的所述SNP基因芯片得到SNP位点比率及杂合型位点比率，根据所述SNP位点比率及所述杂合型位点比率计算获得所述样本的杂合概率，所述样本的杂合概率的计算公式如下：样本的杂合概率=杂合型位点比率/SNP位点比率×100%；以及

将获得的所述样本的杂合概率与预设的胚胎分型标准进行比对，根据比对结果对所述样本的胚胎类型进行预分，获得所述样本的胚胎类型，其中，所述胚胎分型标准包括纯合孤雌胚胎和杂合孤雌胚胎，所述预设的胚胎分型标准中，胚胎细胞的杂合概率小于8%的为单原核胚胎，胚胎细胞的杂合概率小于3.5%的为所述纯合孤雌胚胎，胚胎细胞的杂合概率在3.5%~8%之间的为所述杂合孤雌胚胎；

还包括将预分结果为杂合孤雌胚胎的样本进行印记基因表达分析，其中，所述印记基因表达分析包括以下步骤：获取微量所述杂合孤雌胚胎的单细胞样本进行微量细胞转录扩增，得到第二扩增产物；向所述第二扩增产物中分别加入不同的扩增引物后进行PCR反应，得到PCR反应产物，其中，所述扩增引物包括用于扩增母源表达印记基因的引物和用于扩增父源表达印记基因的引物；以及对所述PCR反应产物进行凝胶电泳分析，获得所述样本的父源表达印记信息和母源表达印记信息，其中，所述母源表达印记基因包括NLRP基因及UBE3A基因，所述父源表达印记基因包括SNRPN基因及PEG3基因，用于扩增NLRP基因的正向引物的序列如SEQ ID No.1所示，用于扩增NLRP基因的反向引物的序列如SEQ ID No.2所示，用于扩增UBE3A基因的正向引物的序列如SEQ ID No.3所示，用于扩增UBE3A基因的反向引物的序列如SEQ ID No.4所示，用于扩增SNRPN基因的正向引物的序列如SEQ ID No.5所示，用于扩增SNRPN基因的反向引物的序列如SEQ ID No.6所示，用于扩增PEG3基因的正向引物的序列如SEQ ID No.7所示，用于扩增PEG3基因的反向引物的序列如SEQ ID No.8所示；

还包括将预分结果为杂合孤雌胚胎的样本进行亲源性分析，其中，所述亲源性分析包括以下步骤：获取所述杂合孤雌胚胎的单细胞对应的所述第一扩增产物，并将所述第一扩增产物的短串联重复序列位点扩增，得到样本的短串联重复序列位点信息；获取所述杂合孤雌胚胎的样本对应的父源DNA和母源DNA，分别扩增所述父源DNA和所述母源DNA的短串联重复序列位点，得到父源DNA短串联重复序列位点信息和母源DNA短串联重复序列位点信息；以及将所述样本的短串联重复序列位点信息分别与所述父源DNA短串联重复序列位点信息以及所述母源DNA短串联重复序列位点信息进行比对，分析所述样本的短串联重复序列位点信息来源于父源或者母源；其中，进行扩增的短串联重复序列位点的基因座为D3S1358、TH01、D21S11、D18S51、Penta E、D5S818、D13S317、D7S820、D16S539、CSF1PO、PentaD、Amelogenin、vWA、D8S1179、TPOX以及FGA。

2.一种微量细胞水平鉴别单原核胚胎类型的系统，其特征在于，所述系统包括：

第一扩增装置，将单原核胚胎样本体外培养至囊胚，取所述囊胚滋养层消化成单细胞，收集微量所述单细胞进行全基因组扩增，得到第一扩增产物；

基因杂交装置，用于将所述第一扩增产物与SNP基因芯片杂交，扫描杂交后的所述SNP基因芯片得到SNP位点比率及杂合型位点比率，根据所述SNP位点比率及所述杂合型位点比率计算获得所述样本的杂合概率，所述样本的杂合概率的计算公式如下：样本的杂合概率=杂合型位点比率/SNP位点比率×100%；以及

分型装置，将获得的所述样本的杂合概率与预设的胚胎分型标准进行比对，根据比对结果对所述样本的胚胎类型进行预分，获得所述样本的胚胎类型，其中，所述胚胎分型标准包括纯合孤雌胚胎和杂合孤雌胚胎，所述预设的胚胎分型标准中，胚胎细胞的杂合概率小于8%的为单原核胚胎，胚胎细胞的杂合概率小于3.5%的为所述纯合孤雌胚胎，胚胎细胞的杂合概率在3.5%~8%之间的为所述杂合孤雌胚胎；

所述系统还包括：印记基因表达分析装置，用于将预分结果为杂合孤雌胚胎的样本进行印记基因表达分析，其中，所述印记基因表达分析装置包括第二扩增装置、PCR反应装置以及凝胶电泳分析装置，其中，第二扩增装置，用于获取微量所述杂合孤雌胚胎的单细胞样本进行微量细胞转录扩增，得到第二扩增产物；PCR反应装置，用于向所述第二扩增产物中分别加入不同的扩增引物后进行PCR反应，得到PCR反应产物，其中，所述扩增引物包括用于扩增母源表达印记基因的引物和用于扩增父源表达印记基因的引物；凝胶电泳分析装置，用于对所述PCR反应产物进行凝胶电泳分析，获得所述样本的父源表达印记信息和母源表达印记信息，所述母源表达印记基因包括NLRP基因及UBE3A基因，所述父源表达印记基因包括SNRPN基因及PEG3基因，用于扩增NLRP基因的正向引物的序列如SEQ ID No.1所示，用于扩增NLRP基因的反向引物的序列如SEQ ID No.2所示，用于扩增UBE3A基因的正向引物的序列如SEQ ID No.3所示，用于扩增UBE3A基因的反向引物的序列如SEQ ID No.4所示，用于扩增SNRPN基因的正向引物的序列如SEQ ID No.5所示，用于扩增SNRPN基因的反向引物的序列如SEQ ID No.6所示，用于扩增PEG3基因的正向引物的序列如SEQ ID No.7所示，用于扩增PEG3基因的反向引物的序列如SEQ ID No.8所示；

所述系统还包括：亲源性分析装置，用于将预分结果为杂合孤雌胚胎的样本进行亲源性分析，其中，所述亲源性分析装置包括第三扩增装置、父源和母源序列获取装置以及比对装置，其中，第三扩增装置，用于获取所述杂合孤雌胚胎的单细胞对应的所述第一扩增产物，并将所述第一扩增产物的短串联重复序列位点扩增，得到样本的短串联重复序列位点信息；父源和母源序列获取装置，用于获取所述杂合孤雌胚胎的样本对应的父源DNA和母源DNA，分别扩增所述父源DNA和所述母源DNA的短串联重复序列位点，得到父源DNA短串联重复序列位点信息和母源DNA短串联重复序列位点信息；比对装置，用于将所述样本的短串联重复序列位点信息分别与所述父源DNA短串联重复序列位点信息以及所述母源DNA短串联重复序列位点信息进行比对，分析所述样本的短串联重复序列位点信息来源于父源或者母源；其中，进行扩增的短串联重复序列位点的基因座为D3S1358、TH01、D21S11、D18S51、Penta E、D5S818、D13S317、D7S820、D16S539、CSF1PO、Penta D、Amelogenin、vWA、D8S1179、TPOX以及FGA。