[发明专利]一种支原体污染的处理方法

说明书

技术领域

本发明涉及生物技术领域，更具体地，涉及一种支原体污染的处理方法。

背景技术

在细胞培养技术是一种体外增殖细胞的常规实验技术，目前被广泛用于教学、科研和临床实验。污染控制是细胞培养能否成功的关键所在。引起培养细胞污染的微生物有细菌、霉菌、黑胶虫、支原体等，其中支原体是常见的污染物。

支原体在体型上比细菌和真菌小，一般的光学显微镜并不能观察到其存在，且受到支原体污染的细胞有相当一部分仍然可以生长增殖，因此支原体污染相较于细菌和真菌的污染并不容易发现。被支原体污染的细胞，不可避免的会在细胞代谢和功能发生改变，从而影响利用污染细胞进行实验的结果，同时也是生物制品的一个安全隐患。

目前，培养的细胞一旦发生支原体污染，大多的解决方式是灭活后丢弃，但是如果细胞是非常珍贵无法替代的，这种方法就不能使用了。

发明内容

鉴于上述问题，本发明提出了一种支原体污染的处理方法实现在不灭活后丢弃的前提下清除支原体污染的目的，本发明采用如下技术方案：

提供一种支原体污染的处理方法，包括以下步骤：

(1)获取待处理的细胞；

(2)用含10ug/mL环丙沙星的培养基培养所述待处理的细胞；

(3)定时更新所述培养基，并且使所述待处理的细胞的生长密度保持在50％-80％；

(4)检测不到支原体污染的情况之后停止使用所述培养基。

优选地，所述定时更新所述培养基的方法采用如下任意一种：

每隔固定天数更新所述培养基；

每当所述细胞的生长密度达到所述第一预设密度时，更新所述培养基。

优选地，所述第一预设密度为75％-85％。

优选地，所述使所述细胞生长密度保持在50％-80％通过如下步骤：

检测所述待处理的细胞的生长密度；

使用胰酶消化并弃去多余的细胞；

用新的所述培养基继续培养。

优选地，所述检测不到支原体污染的情况之后停止使用所述培养基为通过PCR检测不到支原体的DNA的存在时停止使用所述培养基。

优选地，所述检测不到支原体污染的情况之后停止使用所述培养基为当所述待处理的细胞处理时长超过两周之后停止使用所述培养基。

优选地，所述培养基为含20％胎牛血清的DMEM培养基。

优选地，所述待处理的细胞的获取方法包括如下步骤：

在培养瓶中培养支原体污染的细胞至第二预设密度，舍弃上清液，使用磷酸缓冲溶液洗涤两次；

使用胰蛋白酶溶液进行消化；

用新鲜的基础培养基终止消化，并重悬细胞，得到所述待处理的细胞。

优选地，所述第二预设密度为75％-85％。

优选地，所述消化过程在预设条件下进行，所述预设条件为：温度37℃、CO₂浓度5％。

优选地，所述新鲜的基础培养基为含20％胎牛血清的DMEM培养基。

与现有技术相比，该发明一种支原体污染的处理方法具有如下有益效果：

本发明一种支原体污染的处理方法采用在培养基中添加环丙沙星的方法去除支原体，达到了在对细胞的影响小情况下，即并不是采用先灭活后丢弃方式，彻底清除支原体污染的目的，同时还具有停止使用环丙沙星后不复发的优势，在一定程度上提高了非常珍贵的无法替代的细胞生存能力，便于人们的研究。

本发明一种支原体污染的处理方法采用环丙沙星材料具有简单易取，成本低廉的优势，降低了本发明的应用门槛，同时便于本发明的推广应用。

本发明一种支原体污染的处理方法具有操作简单，步骤少、时间短的特点，在一定程度上提高了人们的生产效率。

附图说明

为了更清楚地说明本发明实施例中的技术方案，下面将对实施例描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本发明的一些实施例，对于本领域技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。

图1示出了本发明一个实施例一种支原体污染的处理方法流程图；

图2示出了本发明一个实施例一种支原体污染的处理方法的PCR检测支原体的DNA电泳示意图；

图3示出了本发明一个实施例一种支原体污染的处理方法的环丙沙星处理一周的HepGL细胞光镜图；

图4示出了本发明一个实施例一种支原体污染的处理方法的停止使用含10ug/mL环丙沙星的培养基的两周后的HepGL细胞光镜图。