[发明专利]一种淡水鱼抗氧化物活性肽的制备方法

权利要求书

1.一种淡水鱼抗氧化物活性肽的制备方法，其特征在于：包括，

预处理：将淡水鱼鱼糜与NaCl溶液混合，均质搅拌离心后取沉淀，加入CaCl₂和柠檬酸混合液，均质搅拌离心后取沉淀冻干，得到预处理后的鱼糜；其中，所述NaCl溶液质量浓度0.2％～1.0％，其添加质量为鱼糜质量的2～5倍；所述CaCl₂和柠檬酸混合液中CaCl₂浓度为5～10mmol/L，柠檬酸浓度为1～10mmol/L，其添加量为鱼糜质量的2～5倍；所述均质搅拌离心，其是在10000～13000rpm下均质1～3min，以200～1000rpm搅拌30～60min，在4000～10000×g下离心10～15min；

制备鱼蛋白酶解物：对预处理后的鱼糜进行碱性蛋白酶酶解、胃蛋白酶酶解、胰蛋白酶和糜蛋白酶酶解，离心收集上清液冻干，得到鱼蛋白酶解物；其中，所述碱性蛋白酶酶解，其是向预处理后的鱼糜加入鱼糜质量15～25倍的水，均质后调节鱼浆液pH为6.0～8.5，调节温度为50～60℃，添加占鱼糜质量0.67％～2％的碱性蛋白酶，在50～60℃条件酶解1～3h，然后调节酶解液pH为5.0～5.5终止碱性蛋白酶酶解反应；所述胃蛋白酶酶解，其是添加鱼糜质量20～40倍的30～40mmol/L NaCl，调节混合液pH为1.5～2.0，调节温度为35～40℃，添加占鱼糜质量3.3％～10％的胃蛋白酶，在35～40℃酶解0.5～1.5h，然后调节pH至7.0～7.5终止胃蛋白酶酶解反应；所述胰蛋白酶和糜蛋白酶酶解，其是添加鱼糜质量100～150倍的磷酸钠缓冲溶液，最终保持磷酸钠缓冲溶液浓度为0.01～0.05mol/L，pH为6.0～7.0，添加占鱼糜质量0.67％～2％的胰蛋白酶，添加占鱼糜质量0.67％～2％的糜蛋白酶，在35～40℃酶解1～3h，在95～100℃下保温5～10min终止酶解反应，然后冷却至室温；

制备抗氧化物活性肽：将制得的蛋白酶解物溶解于水，逐级过滤膜，将透过液冻干，得到淡水鱼抗氧化物活性肽；其中，所述逐级过滤膜，其是分别过分子截留量为10、5、3及1kDa的超滤膜，再过200～300Da的纳滤膜。

2.根据权利要求1所述淡水鱼抗氧化物活性肽的制备方法，其特征在于：所述离心收集上清液，其中，离心条件为在4000～10000×g下离心10～15min。

3.根据权利要求1或2所述淡水鱼抗氧化物活性肽的制备方法，其特征在于：所述胰蛋白酶，其酶活为2200～3000U/mg；所述糜蛋白酶，其酶活为700～1000U/mg；所述碱性蛋白酶，其酶活为150～300U/mg；所述胃蛋白酶，其酶活为1100～1400U/mg。