[发明专利]一种低成本纯化六胜肽的方法

说明书

本发明公开了一种纯化六胜肽的方法，采用反相聚合物色谱柱，将六胜肽粗品水溶液上样后，先用碱性流动相冲洗以除去大批量六胜肽粗品中的三氟乙酸，再酸性流动相洗脱得到醋酸六胜肽并去除六胜肽中的杂质。此方法仅需一步纯化，降低了生产成本，不仅能得到纯度大于95％的六胜肽，而且能达到纯化六胜肽成本低、收率高、产业化的要求。

技术领域

本发明属于多肽纯化领域，具体涉及一种六胜肽的纯化方法。

背景技术

六胜肽又称六元胜肽，它广泛分布于人体各处，是人体自身存在且必须的活性物质，它具有肉毒素的全部功能，但避免了肉毒素必须采用注射应用方式和使用成本高昂的缺点。

六胜肽现已成为风靡世界的抗皱化妆品原料，许多高端化妆品均应用了六胜肽成分用于抗皱。瑞士传奇集团护肤实验室于2010年研发的MAGIC CARE魔法护理六胜肽平皱紧致原液是六胜肽美容产品的尖端代表。六胜肽做为化妆品原料时纯度要求≥95％,然而合成的六胜肽含有大量的杂质，需进一步纯化才可以作为化妆品原料。

在第201310593375.9号中国专利申请“一种六胜肽的液相分段合成方法”中，公开了一种六胜肽的纯化方法，其中在合成粗品六胜肽后，用反相高效液相色谱纯化粗品六胜肽以得到六胜肽。该方法的有机试剂用量过高，成本也高并且还需要进一步用弱阴离子交换柱转盐才可得到合格的醋酸六胜肽。

发明内容

本发明所要解决的技术问题在于克服现有六胜肽纯化方法存在的缺点，提供一种成本低、纯度高，适合产业化的醋酸六胜肽纯化方法。

本发明提供一种纯化六胜肽的方法，所述方法采用聚合物反相色谱柱通过反相高效液相色谱法纯化六胜肽粗品水溶液，其中将六胜肽粗品水溶液上样后，先用碱性流动相冲洗，然后再用含醋酸的酸性流动相梯度洗脱得到醋酸六胜肽溶液。

在本发明的一个实施方案中，所述聚合物反相色谱柱的填料为F型SBC MCI GEL反相色谱填料。优选地，所述F型SBC MCI GEL反相色谱填料的粒径为30～50μm。

在本发明的一个实施方案中，六胜肽粗品水溶液通过将六胜肽粗品溶解于水溶液，调节pH值至6-9，用滤膜过滤并收集滤液来制备。优选地，所述六胜肽粗品与水的质量百分比为1:5-1:30，更优选为1:20。优选地，将溶解后得到的溶液的pH调节为8.5，更优选地用氨水调节溶解后得到的溶液的pH。

在本发明的一个实施方案中，所述六胜肽粗品为通过固相合成方法得到的六胜肽粗品。

在本发明的一个实施方案中，碱性流动相由碱性流动相A和碱性流动相B组成，所述碱性流动相A为pH值为7.6-8.5的水溶液，所述碱性流动相B为7.6-8.5的甲醇溶液。在碱性上样时，碱性流动相A与碱性流动相B的比例为(99-98):(1-2)，优选地，碱性流动相A与碱性流动相B的比例为99:1(实施例1和2中所采用的比例)。优选地，所述碱性流动相的流速为10-300ml/分钟，更优选为50-150ml/分钟。

在本发明的一个实施方案中，所述含醋酸的酸性流动相由酸性流动相A和酸性流动相B组成，所述酸性流动相A为含0.1-5％(体积百分比)醋酸的水溶液，所述酸性流动相B为含0.1-5％(体积百分比)醋酸的甲醇溶液。优选地，用酸性流动相A和酸性流动相B进行梯度洗脱，所用洗脱梯度为酸性流动相A与酸性流动相B的比例由(98.5-99.5):(0.5-1.5)到(93-95)：(5-7)。优选地，洗脱梯度为酸性流动相A与酸性流动相B的比例由99:1到95:5，或由99:1到93:7。优选地，所述酸性流动相的流速为10-300ml/分钟，更优选为50-150ml/分钟。