[发明专利]一种溶酶体靶向次氯酸比率荧光探针及其制备方法与应用

权利要求书

1.一种溶酶体靶向次氯酸比率荧光探针，其特征在于，该探针分子的分子式为：C₄₉H₅₅N₇O₅，具有如下所示结构：

2.根据权利要求1所述的荧光探针，其特征在于，所述探针随着NaClO当量的增加，该荧光探针在385nm的吸收逐渐降低，而在560nm的吸收逐渐增强，紫外光谱成比率变化。

3.根据权利要求1所述的荧光探针，其特征在于，所述探针在没有加入次氯酸的条件下，以380nm激发波长激发，只有在455nm处有很强的荧光发射，以500nm激发波长激发，没有荧光发射；随着NaClO加入当量的增加，455nm处的荧光强度逐渐减弱，584nm处的荧光强度逐渐增强，荧光光谱成比率变化。

4.一种权利要求1、2或3所述的溶酶体靶向次氯酸比率荧光探针的制备方法，其特征在于，它包括以下步骤：

1)将1eq的4-二乙胺基酮酸和1eq的间羟基苯基哌嗪溶于3ml浓硫酸中，90℃加热3小时，冷却到室温，冰浴下，加入4ml高氯酸，得到粗产品，柱层析分离得化合物1，所述化合物1结构式如下：

2)将1eq的化合物1溶于乙醇，滴加10eq的80％水合肼，回流3小时，反应完成后，减压旋干溶剂得粗产品并用柱层析分离后得化合物2，所述化合物2结构式如下：

3)将1eq化合物2和1eq的6-二乙胺基萘羧酸、1eq的HOBt、1eq的EDCI溶于DMF中，室温反应6h，反应完全后，加水，乙酸乙酯萃取2次，水洗2-3次，无水硫酸钠干燥，减压旋干溶剂后得粗产品，并用柱层析后分离得化合物3，所述化合物3的结构式如下：

4)将1eq的化合物3溶于氯仿中，向其中滴加3-4滴三乙胺，然后将20μl溴乙酰溴溶于1ml氯仿中，再于0℃条件下缓慢滴加于混合溶液中，滴加完毕后室温反应3-4小时，反应完全后，用二氯甲烷萃取，然后依次水洗、盐水洗、无水硫酸钠干燥，减压旋干溶剂后得粗产品，并用柱层析分离得到化合物4，所述化合物4的结构式如下：

5)将1eq的化合物4，3eq的碳酸钾，微量碘化钾以及3eq的吗啉溶解在DMF中，室温反应6h，反应完全后，乙酸乙酯萃取，水洗2-3次，无水硫酸钠干燥，旋出溶剂得到粗产品后，用柱层析得到目标探针化合物，简记为Lyso-HClO。

5.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，所述步骤(1)中柱层析的洗脱剂配比为：二氯甲烷/甲醇＝20:1。

6.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，所述步骤(2)中柱层析的洗脱剂配比为：二氯甲烷/甲醇＝20:1。

7.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，所述步骤(3)中柱层析的洗脱剂配比为：二氯甲烷/甲醇＝30:1。

8.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，所述步骤(4)中柱层析的洗脱剂配比为：二氯甲烷/甲醇＝20:1。

9.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，所述步骤(5)中柱层析的洗脱剂配比为：二氯甲烷/石油醚＝1:1。

10.一种权利要求1、2或3所述的溶酶体靶向次氯酸比率荧光探针的应用，其特征在于，该荧光探针可以应用于生物细胞体系中次氯酸的传感检测；所述的传感检测包含荧光检测，目视定性检测，细胞成像检测。