[发明专利]细胞糖胺聚糖组合物及其制备和使用方法

说明书

本文公开了来源于经遗传修饰的细胞的基本上纯的糖胺聚糖组合物。

交叉引用

本申请要求于2015年12月18日提交的美国申请序列号62/269,879的权益，其通过引用以其全文并入本文。

背景技术

由于糖胺聚糖如硫酸乙酰肝素、硫酸软骨素、硫酸角质素和透明质酸特异性地结合多种蛋白质，因此它们在细胞和组织特异性生理学、病理生理学和发育中发挥着重要作用。这些蛋白质包括酶、细胞外信号传导分子、趋化因子、脂质结合蛋白或膜结合蛋白、粘附蛋白和致病蛋白，从而使得糖胺聚糖在炎症过程、细胞生长和分化、血液学、细胞-细胞和细胞-基质相互作用、脂质转运和清除/代谢以及宿主防御和病毒感染中具有重要的生物学作用。

发明内容

本文公开了来源于经遗传修饰的细胞系的包含硫酸乙酰肝素的组合物，其中该组合物基本上不含硫酸软骨素、硫酸皮肤素、硫酸角质素和/或透明质酸。在一些实施方案中，该组合物来源于经遗传修饰成缺乏表1或表2中列出的一种或多种基因的细胞系。在一些实施方案中，该组合物来源于经遗传修饰成缺乏以下各项中的一个或多个的细胞系：硫酸软骨素合酶1(ChSy)、硫酸软骨素N-乙酰半乳糖胺基转移酶2(CSGalNAcT2)、软骨素聚合因子(ChPF)、硫酸乙酰肝素2-O-磺基转移酶(HS2ST)、葡糖醛酸差向异构酶(GLCE)、硫酸乙酰肝素N-脱乙酰酶/磺基转移酶-1(HSNDST1)、硫酸乙酰肝素N-脱乙酰酶/磺基转移酶-2(HSNDST2)、硫酸酯酶1(Sulf1)、硫酸酯酶2(Sulf2)、β-葡糖醛酸糖苷酶(GUSB)、半乳糖胺-6-硫酸酯酶(GALNS)、α-L-艾杜糖苷酸酶(IDUA)、磺酸胺酶(SGSH)、N-乙酰转移酶(AANAT、ARD1A、GNPNAT1、HGSNAT、MAK10、NAT1、NAT2、NAT5、NAT6、NAT8、NAT8L、NAT9、NAT10、NAT11、NAT12、NAT13、NAT14、NAT14)、糖醛酸-2-硫酸酯酶(IDS)、α-N-乙酰葡糖苷酶(NAGLU)、PAPS合酶(PAPSS1、PAPSS2)、木糖基转移酶1(XYLT1)、木糖基转移酶2(XYLT2)、半乳糖基转移酶1(B4GALT1)、半乳糖基转移酶2(B4GALT2)、葡糖苷酸基转移酶1(UDPGT)、Exostosin-样糖基转移酶3(EXTL3)、Exostosin糖基转移酶1(EXT1)、Exostosin糖基转移酶2(EXT2)、乙酰肝素酶(HPSE)、磷脂酰肌醇蛋白聚糖1(GPC1)、磷脂酰肌醇蛋白聚糖2(GPC2)、磷脂酰肌醇蛋白聚糖3(GPC3)、磷脂酰肌醇蛋白聚糖4(GPC4)、磷脂酰肌醇蛋白聚糖5(GPC5)、磷脂酰肌醇蛋白聚糖6(GPC6)、共结合蛋白聚糖1(SDC1)、共结合蛋白聚糖2(SDC2)、共结合蛋白聚糖3(SDC3)、共结合蛋白聚糖4(SDC4)、β聚糖(BGCAN/TGFBR3)、CD44V3(CD44V3)、神经纤毛蛋白1(NRP1)、丝甘蛋白(SRGN)、基底膜聚糖(PLC)、聚集蛋白(AGRN)或胶原蛋白18(COL18A1)。在一些实施方案中，该组合物来源于经遗传修饰成缺乏硫酸软骨素合酶1(ChSy)的细胞系。在一些实施方案中，该组合物来源于不产生硫酸软骨素的细胞。在一些实施方案中，该组合物来源于经遗传修饰成对于表1或表2中列出的一种或多种基因是转基因的细胞系。在一些实施方案中，该组合物来源于经遗传修饰成对于以下各项中的一个或多个是转基因的细胞系：硫酸乙酰肝素N-脱乙酰酶/磺基转移酶-3(HSNDST3)、硫酸乙酰肝素N-脱乙酰酶/磺基转移酶-4(HSNDST4)、硫酸乙酰肝素6-O-磺基转移酶1(HS6ST1)、硫酸乙酰肝素6-O-磺基转移酶2(HS6ST2)、硫酸乙酰肝素6-O-磺基转移酶3(HS6ST3)、硫酸乙酰肝素6-O-磺基转移酶4(HS6ST4)、硫酸乙酰肝素(葡糖胺)3-O-磺基转移酶1a(HS3ST1A)、硫酸乙酰肝素(葡糖胺)3-O-磺基转移酶1b(HS3ST1B)、硫酸乙酰肝素(葡糖胺)3-O-磺基转移酶1 2(HS3ST2)、硫酸乙酰肝素(葡糖胺)3-O-磺基转移酶3a或3b(HS3ST3a或3b)、硫酸乙酰肝素(葡糖胺)3-O-磺基转移酶3(HS3ST4)、硫酸乙酰肝素(葡糖胺)3-O-磺基转移酶5(HS3ST5)、硫酸乙酰肝素(葡糖胺)3-O-磺基转移酶6(HS3ST6)、β-葡糖醛酸糖苷酶(GUSB)、半乳糖胺-6-硫酸酯酶(GALNS)、α-L-艾杜糖苷酸酶(IDUA)、磺酸胺酶(SGSH)、N-乙酰转移酶(HGSNAT)、糖醛酸-2-硫酸酯酶(IDS)、α-N-乙酰葡糖苷酶(NAGLU)、PAPS合酶(PAPSS1、PAPSS2)、木糖基转移酶1(XYLT1)、木糖基转移酶2(XYLT2)、半乳糖基转移酶1(B4GALT1)、半乳糖基转移酶2(B4GALT2)、葡糖苷酸基转移酶1(UDPGT)、Exostosin-样糖基转移酶3(EXTL3)、Exostosin糖基转移酶1(EXT1)、Exostosin糖基转移酶2(EXT2)、乙酰肝素酶(HPSE)、磷脂酰肌醇蛋白聚糖1(GPC1)、磷脂酰肌醇蛋白聚糖2(GPC2)、磷脂酰肌醇蛋白聚糖3(GPC3)、磷脂酰肌醇蛋白聚糖4(GPC4)、磷脂酰肌醇蛋白聚糖5(GPC5)、磷脂酰肌醇蛋白聚糖6(GPC6)、共结合蛋白聚糖1(SDC1)、共结合蛋白聚糖2(SDC2)、共结合蛋白聚糖3(SDC3)、共结合蛋白聚糖4(SDC4)、β聚糖(BGCAN/TGFBR3)、CD44V3(CD44V3)、神经纤毛蛋白1(NRP1)、丝甘蛋白(SRGN)、基底膜聚糖(PLC)、聚集蛋白(AGRN)或胶原蛋白18(COL18A1)。在一些实施方案中，该组合物来源于经遗传修饰成缺乏Chsy1的细胞系。在一些实施方案中，该组合物来源于经遗传修饰成缺乏Chsy1和Hs2st的细胞系。在一些实施方案中，该组合物来源于经遗传修饰成缺乏Chsy1和Glce的细胞系。在一些实施方案中，该组合物来源于经遗传修饰成缺乏Chsy1和Hsndst1的细胞系。在一些实施方案中，该组合物来源于经遗传修饰成缺乏Chsy1和Hsndst2的细胞系。在一些实施方案中，该组合物来源于经遗传修饰成缺乏Chsy1、Hsndst1和Hsndst2的细胞系。在一些实施方案中，该组合物来源于经遗传修饰成缺乏Chsy1和Hsndst3的细胞系。在一些实施方案中，该组合物来源于经遗传修饰成缺乏Chsy1和Hsndst4的细胞系。在一些实施方案中，该组合物来源于经遗传修饰成缺乏Chsy1和Sulf1的细胞系。在一些实施方案中，该组合物来源于经遗传修饰成缺乏Chsy1和Sulf2的细胞系。在一些实施方案中，该组合物来源于经遗传修饰成缺乏Chsy1、Sulf1和Sulf2的细胞系。在一些实施方案中，该组合物来源于经遗传修饰成缺乏Chsy1、Hsndst1和Hsndst2并且被修饰成对于Hsndst3是转基因的细胞系。在一些实施方案中，该组合物来源于经遗传修饰成缺乏Chsy1、Hsndst1和Hsndst2并且被修饰成对于Hsndst4是转基因的细胞系。在一些实施方案中，该组合物来源于经遗传修饰成缺乏Chsy1并且被修饰成对于Hs6st1是转基因的细胞系。在一些实施方案中，该组合物来源于经遗传修饰成缺乏Chsy1并且被修饰成对于Hs6st2是转基因的细胞系。在一些实施方案中，该组合物来源于经遗传修饰成缺乏Chsy1并且被修饰成对于Hs6st3是转基因的细胞系。在一些实施方案中，该组合物来源于经遗传修饰成缺乏Chsy1、Hsndst1和Hsndst2并且被修饰成对于Hs6st1和Hs6st2是转基因的细胞系。在一些实施方案中，该组合物来源于经遗传修饰成缺乏Chsy1并且被修饰成对于Hs3st1是转基因的细胞系。在一些实施方案中，该组合物来源于经遗传修饰成缺乏Chsy1并且被修饰成对于Hs3st2是转基因的细胞系。在一些实施方案中，该组合物来源于经遗传修饰成缺乏Chsy1并且被修饰成对于Hs3st3a是转基因的细胞系。在一些实施方案中，该组合物来源于经遗传修饰成缺乏Chsy1并且被修饰成对于Hs3st3b是转基因的细胞系。在一些实施方案中，该组合物来源于经遗传修饰成缺乏Chsy1并且被修饰成对于Hs3st4是转基因的细胞系。在一些实施方案中，该组合物来源于经遗传修饰成缺乏Chsy1并且被修饰成对于Hs3st5是转基因的细胞系。在一些实施方案中，该组合物来源于经遗传修饰成缺乏Chsy1并且被修饰成对于Hs3st6是转基因的细胞系。在一些实施方案中，该组合物来源于经遗传修饰成缺乏Chsy1并且被修饰成对于Hs6st1、Hs6st2和Hs3st1是转基因的细胞系。在一些实施方案中，该组合物来源于经遗传修饰成缺乏Chsy1并且被修饰成对于Hs6st1、Hs6st2和Hs3st2是转基因的细胞系。在一些实施方案中，该组合物来源于经遗传修饰成缺乏Chsy1并且被修饰成对于Hs6st1、Hs6st2和Hs3st3a或Hs3st3b是转基因的细胞系。在一些实施方案中，该组合物来源于经遗传修饰成缺乏Chsy1并且被修饰成对于Hs6st1、Hs6st2和Hs3st4是转基因的细胞系。在一些实施方案中，该组合物来源于经遗传修饰成缺乏Chsy1并且被修饰成对于Hs6st1、Hs6st2和Hs3st5是转基因的细胞系。在一些实施方案中，该组合物来源于经遗传修饰成缺乏Chsy1并且被修饰成对于Hs6st1、Hs6st2和Hs3st6是转基因的细胞系。在一些实施方案中，该组合物来源于经遗传修饰成缺乏Chsy1、Hsndst1和Hsndst2并且被修饰成对于Hsndst3和Hs6st1是转基因的细胞系。在一些实施方案中，该组合物来源于经遗传修饰成缺乏Chsy1、Hsndst1和Hsndst2并且被修饰成对于Hsndst3和Hs6st2是转基因的细胞系。在一些实施方案中，该组合物来源于经遗传修饰成缺乏Chsy1、Hsndst1和Hsndst2并且被修饰成对于Hsndst3和Hs6st3是转基因的细胞系。在一些实施方案中，该组合物来源于经遗传修饰成缺乏Chsy1、Hsndst1和Hsndst2并且被修饰成对于Hsndst4和Hs6st1是转基因的细胞系。在一些实施方案中，该组合物来源于经遗传修饰成缺乏Chsy1、Hsndst1和Hsndst2并且被修饰成对于Hsndst4和Hs6st2是转基因的细胞系。在一些实施方案中，该组合物来源于经遗传修饰成缺乏Chsy1、Hsndst1和Hsndst2并且被修饰成对于Hsndst4和Hs6st3是转基因的细胞系。在一些实施方案中，该组合物来源于经遗传修饰成缺乏Chsy1、Hsndst1和Hsndst2并且被修饰成对于Hsndst3和Hs3st1是转基因的细胞系。在一些实施方案中，该组合物来源于经遗传修饰成缺乏Chsy1、Hsndst1和Hsndst2并且被修饰成对于Hsndst3和Hs3st2是转基因的细胞系。在一些实施方案中，该组合物来源于经遗传修饰成缺乏Chsy1、Hsndst1和Hsndst2并且被修饰成对于Hsndst3和Hs3st3a是转基因的细胞系。在一些实施方案中，该组合物来源于经遗传修饰成缺乏Chsy1、Hsndst1和Hsndst2并且被修饰成对于Hsndst3和Hs3st3b是转基因的细胞系。在一些实施方案中，该组合物来源于经遗传修饰成缺乏Chsy1、Hsndst1和Hsndst2并且被修饰成对于Hsndst3和Hs3st4是转基因的细胞系。在一些实施方案中，该组合物来源于经遗传修饰成缺乏Chsy1、Hsndst1和Hsndst2并且被修饰成对于Hsndst3和Hs3st5是转基因的细胞系。在一些实施方案中，该组合物来源于经遗传修饰成缺乏Chsy1、Hsndst1和Hsndst2并且被修饰成对于Hsndst3和Hs3st6是转基因的细胞系。在一些实施方案中，该组合物来源于经遗传修饰成缺乏Chsy1、Hsndst1和Hsndst2并且被修饰成对于Hsndst4和Hs3st1是转基因的细胞系。在一些实施方案中，该组合物来源于经遗传修饰成缺乏Chsy1、Hsndst1和Hsndst2并且被修饰成对于Hsndst4和Hs3st2是转基因的细胞系。在一些实施方案中，该组合物来源于经遗传修饰成缺乏Chsy1、Hsndst1和Hsndst2并且被修饰成对于Hsndst4和Hs3st3a是转基因的细胞系。在一些实施方案中，该组合物来源于经遗传修饰成缺乏Chsy1、Hsndst1和Hsndst2并且被修饰成对于Hsndst4和Hs3st3b是转基因的细胞系。在一些实施方案中，该组合物来源于经遗传修饰成缺乏Chsy1、Hsndst1和Hsndst2并且被修饰成对于Hsndst4和Hs3st4是转基因的细胞系。在一些实施方案中，该组合物来源于经遗传修饰成缺乏Chsy1、Hsndst1和Hsndst2并且被修饰成对于Hsndst4和Hs3st5是转基因的细胞系。在一些实施方案中，该组合物来源于经遗传修饰成缺乏Chsy1、Hsndst1和Hsndst2并且被修饰成对于Hsndst4和Hs3st6是转基因的细胞系。在一些实施方案中，该组合物来源于经遗传修饰成缺乏Chsy1、Hsndst1和Hsndst2并且被修饰成对于Hsndst3、Hs6st1/2和Hs3st1是转基因的细胞系。在一些实施方案中，该组合物来源于经遗传修饰成缺乏Chsy1、Hsndst1和Hsndst2并且被修饰成对于Hsndst3、Hs6st1/2和Hs3st2是转基因的细胞系。在一些实施方案中，该组合物来源于经遗传修饰成缺乏Chsy1、Hsndst1和Hsndst2并且被修饰成对于Hsndst3、Hs6st1/2和Hs3st3a是转基因的细胞系。在一些实施方案中，该组合物来源于经遗传修饰成缺乏Chsy1、Hsndst1和Hsndst2并且被修饰成对于Hsndst3、Hs6st1/2和Hs3st3b是转基因的细胞系。在一些实施方案中，该组合物来源于经遗传修饰成缺乏Chsy1、Hsndst1和Hsndst2并且被修饰成对于Hsndst3、Hs6st1/2和Hs3st4是转基因的细胞系。在一些实施方案中，该组合物来源于经遗传修饰成缺乏Chsy1、Hsndst1和Hsndst2并且被修饰成对于Hsndst3、Hs6st1/2和Hs3st5是转基因的细胞系。在一些实施方案中，该组合物来源于经遗传修饰成缺乏Chsy1、Hsndst1和Hsndst2并且被修饰成对于Hsndst3、Hs6st1/2和Hs3st6是转基因的细胞系。在一些实施方案中，该组合物来源于经遗传修饰成缺乏Chsy1、Hsndst1和Hsndst2并且被修饰成对于Hsndst4、Hs6st1/2和Hs3st1是转基因的细胞系。在一些实施方案中，该组合物来源于经遗传修饰成缺乏Chsy1、Hsndst1和Hsndst2并且被修饰成对于Hsndst4、Hs6st1/2和Hs3st2是转基因的细胞系。在一些实施方案中，该组合物来源于经遗传修饰成缺乏Chsy1、Hsndst1和Hsndst2并且被修饰成对于Hsndst4、Hs6st1/2和Hs3st3a是转基因的细胞系。在一些实施方案中，该组合物来源于经遗传修饰成缺乏Chsy1、Hsndst1和Hsndst2并且被修饰成对于Hsndst4、Hs6st1/2和Hs3st3b是转基因的细胞系。在一些实施方案中，该组合物来源于经遗传修饰成缺乏Chsy1、Hsndst1和Hsndst2并且被修饰成对于Hsndst4、Hs6st1/2和Hs3st4是转基因的细胞系。在一些实施方案中，该组合物来源于经遗传修饰成缺乏Chsy1、Hsndst1和Hsndst2并且被修饰成对于Hsndst4、Hs6st1/2和Hs3st5是转基因的细胞系。在一些实施方案中，该组合物来源于经遗传修饰成缺乏Chsy1、Hsndst1和Hsndst2并且被修饰成对于Hsndst4、Hs6st1/2和Hs3st6是转基因的细胞系。在一些实施方案中，该组合物包含具有确定的硫酸化模式的硫酸乙酰肝素。在一些实施方案中，该硫酸乙酰肝素至少95％不含蛋白质和核酸污染物。在一些实施方案中，该硫酸乙酰肝素至少95％不含硫酸软骨素。在一些实施方案中，该硫酸乙酰肝素至少99％不含蛋白质和核酸。在一些实施方案中，该硫酸乙酰肝素至少99％不含硫酸软骨素。