[发明专利]NK细胞培养用培养基添加试剂盒及利用所述试剂盒的NK细胞培养方法

权利要求书

1.一种NK细胞培养用培养基添加试剂盒，其特征在于，包括：

B单元，由基础溶液构成，所述基础溶液包含IL-2、L-谷氨酰胺及培养细胞用培养基；

C1单元，由第一细胞因子溶液构成，所述第一细胞因子溶液通过将IL-12及IL-18溶解于所述基础溶液中，以使以0.5～5ng/mL的浓度包含所述IL-12，以2～50ng/mL的浓度包含所述IL-18来形成；

C2单元，由第二细胞因子溶液构成，所述第二细胞因子溶液通过将IL-15溶解于所述基础溶液中，以使以10～50ng/mL的浓度包含所述IL-15来形成；

A1单元，所述A1单元是第一抗体溶液，所述第一抗体溶液通过将抗CD16抗体及抗CD56抗体溶解于所述基础溶液中，以使分别以0.1～15ug/mL的浓度包含所述抗CD16抗体及抗CD56抗体来形成；

A2单元，所述A2单元是第二抗体溶液，所述第二抗体溶液以所述第一抗体溶液：所述基础溶液的容积比为1：6～10包含所述第一抗体溶液和所述基础溶液；以及

D单元，所述D单元是抗体-细胞因子混合溶液，所述抗体-细胞因子混合溶液通过将抗CD3抗体溶解于所述第一细胞因子溶液中，以使以1～12ug/mL浓度包含所述抗CD3抗体来形成。

2.根据权利要求1所述的NK细胞培养用培养基添加试剂盒，其特征在于，

将所述A1单元中的所述抗CD16抗体、抗CD56抗体及所述基础溶液进行分开包装，在培养基添加步骤中进行混合来形成所述第一抗体溶液。

3.根据权利要求1所述的NK细胞培养用培养基添加试剂盒，其特征在于，

分别将所述A2单元中的所述第一抗体溶液的抗CD16抗体、抗CD56抗体以及所述基础溶液与包含在所述A2单元中的所述第一抗体溶液的所述基础溶液进行分开包装，在培养基添加步骤中进行混合来形成所述第二抗体溶液。

4.根据权利要求1所述的NK细胞培养用培养基添加试剂盒，其特征在于，

分别将所述D单元中的抗CD3抗体及所述第一细胞因子溶液进行分开包装，在培养基添加步骤中进行混合来形成所述抗体-细胞因子混合溶液。

5.根据权利要求1所述的NK细胞培养用培养基添加试剂盒，其特征在于，

所述多个单元以A1单元、D单元、C1单元、A2单元、C2单元、A2单元及B单元的顺序添加至淋巴细胞培养基中。

6.一种使用权利要求1-5中任一项所述的NK细胞培养用培养基添加试剂盒的NK细胞培养方法，其特征在于，包括：

第一步骤，在分离出的淋巴细胞中添加A1单元的第一抗体溶液之后，添加自身血浆；

第二步骤，在执行所述第一步骤的培养基中添加D单元的抗体-细胞因子混合溶液；

第三步骤，在执行所述第二步骤的培养基中添加C1单元的第一细胞因子溶液之后，添加自身血浆或FBS；

第四步骤，在执行所述第三步骤的培养基中添加A2单元的第二抗体溶液之后，添加自身血浆或FBS；

第五步骤，在执行所述第四步骤的培养基中添加C2单元的第二细胞因子溶液之后，添加自身血浆或FBS；

第六步骤，在执行所述第五步骤培养基中添加第三抗体溶液及自身血浆或FBS，其中所述第三抗体溶液是所述第二抗体溶液的一部分；以及

第七步骤，在执行所述第六步骤的培养基中添加B单元的基础溶液及自身血浆或FBS；

其中所述B单元、所述C1单元、所述C2单元、所述A1单元、所述A2单元和所述D单元如权利要求1所限定；以及

其中所述D单元的所述抗CD3抗体在所述方法的步骤期间未固定化。

7.根据权利要求6所述的NK细胞培养方法，其特征在于，

所述自身血浆每1ml血浆包含40usp unit以上的肝素。

8.根据权利要求6所述的NK细胞培养方法，其特征在于，

所述添加的自身血浆或FBS的含量不到整个培养基的10容积％。