[发明专利]用于治疗脊髓性肌萎缩的腺相关病毒载体

说明书

提供了可用于治疗脊髓性肌萎缩的组合物和方法。该组合物包含含有AAV衣壳，例如AAVrh.10衣壳，以及编码功能性SMN蛋白的核酸序列的重组腺相关病毒载体。该方法包括将这些组合物施用于需要其的人。

以电子形式提交的材料的引用并入

申请人经此引用并入同此以电子形式提交的序列表材料。该文件标记为“16-7655PCT_SEQ_Listing_ST25.txt”。

发明背景

脊髓性肌萎缩（SMA）是一种由端粒SMN1——编码涉及剪接体生源说的遍在表达蛋白（运动神经元存活——SMN）的基因——中的突变引起的神经肌肉疾病。由于不明原因，SMN缺陷导致对下运动神经元的选择性毒性，导致渐进性神经元丢失和肌无力。该疾病的严重程度由同源基因（SMN2）的着丝粒复制的拷贝数来改变，所述同源基因携带导致产生仅少量全长SMN转录物的剪接位点突变。携带1-2份SMN2拷贝的患者呈现SMA的严重形式，其特征在于在生命的头几个月内发作并迅速进展为呼吸衰竭。具有3份SMN2拷贝的患者通常表现出减弱的疾病形式，通常在6个月龄后出现。虽然许多人从未获得行走能力，但他们很少进展至呼吸衰竭，并常常活到成年期。具有四份SMN2拷贝的患者可能直到成年期也不会出现肌无力的逐渐发作。除姑息治疗之外目前尚无SMA的治疗方法。

SMN功能丧失与疾病严重程度之间的相关性使得SMA成为基因疗法的潜在靶。先前涉及在SMA-小鼠模型中对CNS（中枢神经系统）施用腺相关病毒AAV8-hSMN的研究证实了SMN在脊髓中的表达以及SMA表型可以得到拯救；但是，仅产生运动神经元数量的适度保存——并且并未实现长期存活（Passini等人, 2010, J Clin Invest 120: 1253-1264）。

该疾病为基因疗法带来了独特的挑战，部分是因为SMN基因产物是细胞内的。由此，对所涉及的运动神经元基础子集的稳健的转导效率对功效而言是重要的。一种替代治疗方法研究了使用注射到小鼠CNS中的反义寡核苷酸以重新定向SMN2的剪接和促进SMN蛋白的产生（Passini等人, 2011, Sci Transl Med 3: 72ra18）。

对于基因疗法而言，基于涉及将基因转移至CNS的动物研究中取得的结果，AAV9作为选择的载体出现。例如，基于SMA小鼠模型中SMN的AAV9转导的剂量响应研究，在非人灵长类（“NHP”）中鞘内注射Passini测试剂量的AAV9以确定是否能够实现标志基因（绿色荧光蛋白，“GFP”）向运动神经元的适当转移（Passini等人, 2014, Human Gene Therapy 25:619-630）。和其他人报道了GFP在小鼠和接受鞘内注射AAV9的NHP的CNS中的广泛分布（Myer等人, 2014, Mol. Ther. 23:477-487和Hinderer等人, 2014, Mol Ther 1: 14051）。AAV9的全身性递送也已经显示穿过了血脑屏障并实现了CFP向CNS的广泛基因转移（Foust等人,2009, Nature Biotech 27: 59-65；Duque等人, 2009, Mol Ther 17: 1187-1196）。

近来，对报道为至少与AAV9一样有效地用于小鼠中许多组织的转导的替代AAV载体——AAVrh10——进行了分析以比较在新生小鼠中进行血管内递送之后实现标志基因GFP向CNS和PNS（外周神经系统）的基因转移的能力。虽然低剂量AAVrh10似乎在受试的组织中诱导了较高的转导，但是在对治疗效果而言可能必需的高剂量下这种差异不太明显（Tanguy等人, 2015, Front Mol Neurosci 8: 第36篇）。

需要有效的针对SMA的治疗方法。

发明内容

在一方面，腺相关病毒载体（AAV）载体包括AAVrh10衣壳和载体基因组，其包含AAV反向末端重复（ITR）和编码人运动神经元存活（SMN）蛋白的核酸序列与引导SMN在宿主细胞中表达的表达控制序列。