[发明专利]用于连接DNA结合结构域和切割结构域的组合物

权利要求书

1.一种二聚体，其包含第一融合分子和第二融合分子，所述第一融合分子包含结合第一靶位点的DNA结合结构域和第一切割结构域，所述第二融合分子包含结合第二靶位点的DNA结合结构域和第二切割结构域，当所述DNA结合结构域与隔开6、7、8或9个碱基对的第一和第二靶位点结合时所述第一和第二切割结构域二聚化，所述第一融合分子包含所述DNA结合结构域与所述第一切割结构域之间的氨基酸接头，其中，

当所述第一和第二靶位点隔开6个碱基对时，所述接头由选自下组的序列构成：SGSLRGVDPMWH(SEQ ID NO:78)，SGRSPEMDWC(SEQ ID NO:62)，GASLGPPWCP(SEQ ID NO:80)，SGLPMGSYGS(SEQ ID NO:81)，SGQSPGDVGF(SEQ ID NO:71)，SGAIYARPIE(SEQ ID NO:82)，SGAQGSTLDF(SEQ ID NO:83)，SGVKRDSEII(SEQ ID NO:84)；

当所述第一和第二靶位点隔开7个碱基对时，所述接头由选自下组的序列构成：SQATPTLYYTPL(SEQ ID NO:88)，SGQPMFSWSD(SEQ ID NO:109)，SGERRQSHVL(SEQ ID NO:114)，SGAIRCHDEFWF(SEQ ID NO:100)，SGALQEPWSI(SEQ ID NO:91)，SGFNHSSCDVVY(SEQ IDNO:138)，QSGKIASPHVVI(SEQ ID NO:147)，SGTPHEVGVYTL(SEQ ID NO:154)，MGDEHRKLRLMSQMRLQVD(SEQ ID NO:254)，KPRTDRKIFSLRLAN(SEQ ID NO:255)，NPLPRNKYPSPYFLH(SEQ ID NO:266)，APPAASKSRTWEMRR(SEQ ID NO:267)，LNRPKLNTRPHYTSV(SEQ ID NO:268)，QTRPPRSFCMLAMTG(SEQ ID NO:269)；

当所述第一和第二靶位点隔开8个碱基对时，所述接头由选自下组的序列构成：MHGPRLPPLKLCGAWSIG(SEQ ID NO:270)，GPRVVTRRVLATVTVA(SEQ ID NO:271)，LGMVSRPRLNQRAPIPKS(SEQ ID NO:272)，QYPRHPTTSKRIGPTDRVLT(SEQ ID NO:273)，YPREATSRRETDILNSKRLLS(SEQ ID NO:274)，QCNPVLKCRTIKPGPSAA(SEQ ID NO:275)；

当所述第一和第二靶位点隔开9个碱基对时，所述接头由选自下组的序列构成：QPTWMKSPRKKRYPTGRLTAQ(SEQ ID NO:276)，DPEYLSQRVPRRRQKPPMTRPY(SEQ ID NO:277)，MEQRVRATNPRRRLAILTTESFM(SEQ ID NO:278)，QSPNMIQRTPKRRTPLTIPLR(SEQ ID NO:279)，AGNCARLTVRPPFSHP(SEQ ID NO:280)，或ERPPRSLASPPHALLL(SEQ ID NO:281)；

所述接头在所述DNA结合结构域的N端与所述切割结构域的C端之间延伸；并且

所述切割结构域是FokI切割结构域，所述DNA结合结构域是锌指蛋白。

2.根据权利要求1所述的二聚体，所述切割结构域是野生型或工程化切割结构域。

3.根据权利要求1所述的二聚体，其中所述第二融合分子包含接头。

4.根据权利要求1所述的二聚体，其中所述DNA结合结构域结合双链靶DNA中的相对或相同的DNA链。

5.据权利要求1所述的二聚体，其中所述二聚体在靶双链DNA中进行双链或单链切割。

6.根据权利要求1所述的二聚体，其中所述切割结构域在二聚化结构域中包含一处或多处突变。