[发明专利]从卵泡抽提物中获得雌性生殖干细胞的方法有效
申请号: | 201680080214.1 | 申请日: | 2016-02-04 |
公开(公告)号: | CN108603168B | 公开(公告)日: | 2021-11-09 |
发明(设计)人: | 吴际 | 申请(专利权)人: | 上海交通大学 |
主分类号: | C12N5/074 | 分类号: | C12N5/074 |
代理公司: | 上海专利商标事务所有限公司 31100 | 代理人: | 陈静 |
地址: | 200240 *** | 国省代码: | 上海;31 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 卵泡 抽提物中 获得 雌性 生殖 干细胞 方法 | ||
1.一种从卵泡抽提物中分离雌性生殖干细胞的方法,其特征在于,所述方法包括:
(1) 从卵泡抽提物中分离出卵巢组织或细胞团块,进行细胞分散以获得单细胞;其中,从卵泡抽提物中分离出卵巢组织或细胞团块的方法包括:使用30-100μm孔径的细胞筛网过滤卵泡抽提物,滞留于筛网上的固体作为卵巢组织或细胞团块;
(2) 将步骤(1)获得的细胞接种到灭活的饲养层细胞上培养,从经过培养的细胞中分选出雌性生殖干细胞标志物阳性细胞。
2.如权利要求1所述的方法,其特征在于,所述的方法还包括步骤:
(3) 将步骤(2)获得的雌性生殖干细胞标志物阳性细胞在饲养层细胞上,进行增殖培养或传代培养。
3.如权利要求2所述的方法,其特征在于,进行增殖培养或传代培养时,使用干细胞培养液培养。
4.如权利要求1所述的方法,其特征在于,用缓冲液将滞留于筛网上的固体作为卵巢组织或细胞团块从筛网上冲刷下来,通过离心的方法从中分离出卵巢组织或细胞团块。
5.如权利要求1所述的方法,其特征在于,步骤(1)中,在进行细胞分散之前,还包括:对获得的卵巢组织或细胞团块进行处理以去除红细胞。
6.如权利要求1或2所述的方法,其特征在于,步骤(1)中,采用选自下组的一种或几种酶进行细胞分散:胶原酶IV,胰酶,胰酶替代物,或Acutase。
7.如权利要求1或2所述的方法,其特征在于,步骤(2)中,所述的饲养层细胞包括:STO细胞,MEF细胞或SNL细胞。
8.如权利要求1或2所述的方法,其特征在于,步骤(2)中,所述的灭活的饲养层细胞是:经丝裂霉素C灭活的饲养层细胞。
9.如权利要求1或2所述的方法,其特征在于,步骤(2)中,在饲养层细胞上培养的时间为10-18天。
10.如权利要求1或2所述的方法,其特征在于,步骤(2)中,将特异性抗雌性生殖干细胞标志物的抗体与磁珠偶联,与经过饲养层细胞培养的细胞进行孵育,分选出雌性生殖干细胞标志物阳性细胞。
11.如权利要求1或2所述的方法,其特征在于,所述的灭活的饲养层细胞如下获得:饲养层细胞用丝裂霉素C处理,清洗后,消化成单细胞,接种到明胶包被的细胞培养板上。
12.如权利要求1或2所述的方法,其特征在于,所述的雌性生殖干细胞标志物包括:DDX4,IFITM3。
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