[发明专利]用于基因组修饰的稳定剂

说明书

本公开大体上涉及对细胞进行基因修饰的组合物和方法。特别地，本公开涉及用于基因组改变(例如位点特异性核酸酶)的稳定剂，和用于非遗传编码改变修饰(例如DNA甲基化)的稳定剂。稳定化方法包括在适当温度下储存试剂、转化为干燥形式以及化学修饰。

技术领域

本公开大体上涉及对细胞进行基因修饰的组合物和方法。特别地，本公开涉及用于基因组改变(例如位点特异性核酸酶)的稳定剂，和用于非遗传编码改变修饰(例如DNA甲基化)的稳定剂。稳定化方法包括在适当温度下储存试剂，转化为干燥形式以及化学修饰。

背景技术

已经研发出许多基因组相互作用系统，如设计师锌指、类转录激活因子效应物(TALs)、CRISPRs以及归巢大范围核酸酶。这些系统存在的一个问题是，其需要识别变化的靶位点和设计特异性针对那些位点的试剂，这往往费力且耗时。在一个方面中，本发明可以有效地设计、制备和使用基因组相互作用试剂。

发明内容

本公开部分地涉及用于核酸分子修饰的组合物和方法。对于修饰基因组的有效系统和技术存在着切实的需求。本发明解决了这种需求且提供了相关优势。

在一些方面中，本发明包括制备一种或多种(例如一种、两种、三种、四种、五种、六种等)稳定的基因改变剂的方法和通过这些方法制备的稳定的基因改变剂。在一些情况下，这些方法包括(a)在溶剂中制备一种或多种基因改变剂，和(b)去除(a)中80％以上的所述溶剂。此外，所述溶剂可以是水性的、有机的(例如一种或多种醇)或者是水性溶剂和一种或多种有机溶剂的混合物。所述溶剂可以通过任何数量的方法去除，包括冷冻干燥、喷雾干燥、喷雾冷冻干燥、超临界流体干燥或真空离心。在一些情况下，介于80％至99.5％之间(例如约80％至约95％、约80％至约90％、约85％至约95％、约85％至约99％、约90％至约99％、约90％至约98％、约90％至约97％、约90％至约96％、约93％至约99％等)的所述溶剂可以从一种或多种基因改变剂中去除。

在一些情况下，所述一种或多种基因改变剂中的至少一种可以是选自由以下组成的群组的一种或多种试剂：(a)TAL效应物-核酸酶融合蛋白、(b)编码TAL效应物-核酸酶融合蛋白的核酸分子、(c)锌指-核酸酶融合蛋白、(d)编码锌指-核酸酶融合蛋白的核酸分子、(e)Cas9蛋白、(f)编码Cas9蛋白的核酸分子、(g)向导RNA以及(h)编码向导RNA的核酸分子。

在一些情况下，单独的基因改变剂被放置在多孔板的两孔或更多孔内。此外，单独的基因改变剂在溶剂中溶解的同时可以被添加到所述多孔板的孔内。同样地，部分或全部溶剂可以从单独的基因改变剂中去除，而单独的基因改变剂在所述多孔板的孔内。

一个或多个供体核酸分子(例如供体DNA)可以与所述基因改变剂共混合。例如，可以在将不同的插入物引入到特定染色体位点的情况下制备细胞。因此，本发明包括在其中将不同核酸片段引入到特定位点的细胞库在一些情况下，供体核酸分子的数量可以是约2至约10,000(例如约5至约10,000、约20至约10,000、约50至约10,000、约90至约10,000、约200至约10,000、约400至约10,000、约800至约10,000、约2,000至约10,000、约2至约10,000、约100至约1,000、约200至约3,000、约150至约1,500等)。

在一个集合中的基因改变剂的数量可能有较大地变化，可以是约2至约10,000(例如约5至约10,000、约20至约10,000、约50至约10,000、约90至约10,000、约200至约10,000、约400至约10,000、约800至约10,000、约2,000至约10,000、约2至约10,000、约100至约1,000、约200至约3,000、约150至约1,500等)。这样的基因改变剂可以放置在一个或多个多孔板的不同孔内。在许多情况下，这样单独的基因改变剂会结合到相同有机体的基因组的不同核苷酸序列上。