[发明专利]用于基因组修饰的稳定剂在审
申请号: | 201680078125.3 | 申请日: | 2016-11-18 |
公开(公告)号: | CN110312798A | 公开(公告)日: | 2019-10-08 |
发明(设计)人: | R·J·波特;N·拉文德尔;J·卡特 | 申请(专利权)人: | 生命技术公司 |
主分类号: | C12N15/10 | 分类号: | C12N15/10;C12N9/96 |
代理公司: | 中国国际贸易促进委员会专利商标事务所 11038 | 代理人: | 唐宏 |
地址: | 美国加*** | 国省代码: | 美国;US |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 稳定剂 基因组修饰 位点特异性 储存试剂 干燥形式 化学修饰 基因修饰 遗传编码 核酸酶 基因组 稳定化 修饰 细胞 转化 | ||
1.一种用于制备一种或多种稳定基因改变剂的方法,所述方法包括:
(a)在溶剂中制备一种或多种基因改变剂,和
(b)去除(a)中多于80%的所述溶剂。
2.根据权利要求1所述的方法,其中所述溶剂是水、一种或多种醇或水和一种或多种醇的混合物。
3.根据权利要求1所述的方法,其中所述一种或多种基因改变剂中的至少一种是选自由以下组成的群组的一种或多种试剂:
(a)TAL效应物-核酸酶融合蛋白、
(b)编码TAL效应物-核酸酶融合蛋白的核酸分子、
(c)锌指-核酸酶融合蛋白、
(d)编码锌指-核酸酶融合蛋白的核酸分子、
(e)Cas9蛋白、
(f)编码Cas9蛋白的核酸分子、
(g)向导RNA以及
(h)编码向导RNA的核酸分子。
4.根据权利要求2所述的方法,其中所述水通过冷冻干燥、喷雾干燥、喷雾冷冻干燥、超临界流体干燥或真空离心去除。
5.根据权利要求1所述的方法,其中在水性溶液中从所述一种或多种基因改变剂中去除所述溶剂的80%至99.5%。
6.根据权利要求1所述的方法,其中单独的基因改变剂放置于多孔板的两个或更多个孔中。
7.根据权利要求6所述的方法,其中将所述单独的基因改变剂加入到所述多孔板的孔中的所述溶剂内。
8.根据权利要求7所述的方法,其中将所述水性溶剂的一些或全部从所述单独的基因改变剂中去除,而所述单独的基因改变剂在所述多孔板的孔中。
9.根据权利要求6所述的方法,其中50至100种单独的基因改变剂被放置在所述多孔板的不同孔中。
10.根据权利要求6所述的方法,其中所述单独的基因改变剂结合到同一个有机体的所述基因组的不同核苷酸序列上。
11.根据权利要求1所述的方法,其中所述水性溶液包含选自由以下组成的群组的一种或多种组分:
(a)一种或多种缓冲液、
(b)一种或多种蛋白酶抑制剂、
(c)一种或多种核酸酶抑制剂
(d)一种或多种盐、
(e)一种或多种碳水化合物、
(f)一种或多种转染剂、
(g)一种或多种多聚胺以及
(h)一种或多种培养基。
12.根据权利要求11所述的方法,其中所述碳水化合物是以下的一种或多种:蔗糖、海藻糖、乳糖或环糊精。
13.根据权利要求1所述的方法,其中去除所述水之前,所述水性溶液的pH值介于4至约11之间。
14.一种用于储存一种或多种基因改变剂的方法,所述方法包括:
(a)在水性溶液中制备一种或多种基因改变剂,
(b)从(a)中制备的所述水性溶液中去除多于90%的水,以及
(c)在储存30天之后基因改变功能活性仍大于75%的条件下放置一种或多种基因改变剂。
15.根据权利要求14所述的方法,其中所述一种或多种基因改变剂中的至少一种的基因改变功能活性在储存至少30天后仍大于90%。
16.根据权利要求14所述的方法,其中所述一种或多种基因改变剂中的至少一种的基因改变功能活性在储存120天后仍大于90%。
17.根据权利要求14所述的方法,其中所述一种或多种基因改变剂中的多于一种被储存在相同的储存容器中。
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