[发明专利]包含微小RNA识别元件的CMV载体

说明书

本发明公开了包含异源抗原和微小RNA识别元件的重组CMV载体，以在源自髓样细胞的微小RNA，活性UL128蛋白和活性UL130蛋白存在下沉默CMV基因的表达。本发明还公开了包含异源抗原和微小RNA识别元件的重组CMV载体，以在源自髓样细胞的微小RNA，无活性UL128蛋白和无活性UL130蛋白存在下沉默CMV基因的表达。本发明还公开了使用这些载体产生非常规免疫应答的方法。这种免疫应答的特征在于产生主要受MHC‑II限制的CD8+T细胞应答。

相关申请的交叉引用

本申请基于并且要求于2015年11月20日提交的名称为CMV VECTORS COMPRISINGMICRORNA RECOGNITION ELEMENTS的美国临时申请第62/258,393号，以及于2016年7月21日提交的名称为CMV VECTORS COMPRISING MICRORNA RECOGNITION ELEMENTS的美国临时申请第62/365,259号的优先权，以上临时申请的公开内容通过引用整体并入本发明。

技术领域

本发明实施方式涉及CMV载体在免疫中的用途，更具体地，涉及用异源抗原免疫后引发非常规免疫应答的改良CMV载体形式的生成。

感谢政府支持

本发明是在美国政府的支持下根据美国国立卫生研究院授予的资助号P01AI094417的条款创建的。美国政府对本发明享有一定的权利。

背景技术

表达猿猴免疫缺陷病毒蛋白的恒河猴巨细胞病毒疫苗(RhCMV/SIV)提供对致病SIV的保护(Hansen SG等，Nat Med 15,293(2009)；Hansen SG等，Nat 473,523(2011)；这两篇文献均通过引用并入本发明)。这种保护与其他T细胞疫苗根本不同之处在于其非常有效并且几乎瞬时发作，约50％的疫苗在病毒血症严重钝化和收缩急性期后表现出对病毒复制的完全控制。尽管受RhCMV保护的猕猴呈现周期性低水平的病毒血症“脉冲”，但没有观察到CD4+记忆T细胞耗竭，没有出现SIV特异性抗体应答，随后，随着时间的推移，病毒核酸变得几乎无法量化而有复制能力的病毒从受保护动物的组织中消失。这些事件在自发SIV优良对照和DNA初始/Ad5加强接种的对照中并未发生(Hansen SG等，Nature 502,100(2013)；其通过引用并入本发明)。考虑到在RhCMV/SIV接种的猕猴中RhCMV诱导的CD8+T细胞在介导这种保护作用中的核心作用，界定这些T细胞的功能特性对理解它们对RhCMV/SIV载体诱导控制SIV复制的机理贡献至关重要。理解这些特性可能反过来导致表达异源抗原的巨细胞病毒疫苗载体的新用途。

CMV可在髓系细胞中潜伏并重新激活，并且巨噬细胞在病毒传播中起核心作用。此外，树突状细胞是必需的体内抗原呈递细胞。表达异源抗原的CMV载体特异性地构建为它们不能在这些细胞中复制，可以用作引发改良的非常规免疫谱的新疫苗候选物。

发明内容

本发明公开了巨细胞病毒(CMV)载体，其包含编码至少一种异源抗原的第一核酸序列；和包含微小RNA识别元件(MRE)的第二核酸序列，所述第二核酸序列在由髓系细胞表达的微小RNA存在下沉默表达。微小RNA识别元件可操作地连接到CMV基因上，该CMV基因是体内CMV生长所必需的或促进体内CMV生长。所述载体还包括编码活性UL128蛋白(或其直系同源物)的核酸序列和编码活性UL130蛋白(或其直系同源物)的核酸序列。在一些实施方式中，所述载体将缺乏活性UL128蛋白和活性UL130蛋白。

本发明还公开了在受试者中对至少一种异源抗原产生免疫应答的方法。该方法包括以有效引起对异源抗原的CD8+T细胞应答的量向受试者施用本发明公开类型的CMV载体。该免疫应答的特征在于至少10％的CD8+T细胞受II类MHC限制，少于10％的细胞受MHC-E限制。

附图说明