[发明专利]非造血组织驻留γδT细胞的扩增及这些细胞的用途

说明书

本发明涉及通过在白细胞介素‑2(IL‑2)和/或白细胞介素‑15(IL‑15)存在下并且在没有TCR激活或共刺激信号的情况下，在没有与基质细胞或上皮细胞直接接触的情况下，通过培养从人或非人动物的非造血组织获得的淋巴细胞在体外扩增非造血组织的γδT细胞。提供了非造血组织驻留γδT细胞扩增的方法以及非造血组织驻留γδT细胞的群体及其用途。

技术领域

本发明涉及一种用于离体(ex vivo)扩增非造血组织驻留γδT细胞的方法。术语“非造血组织驻留γδT细胞”是指驻留在非造血组织内而不是在淋巴器官和血液内的T淋巴细胞的亚群。这样的细胞包括非Vδ2细胞，例如，Vδ1、Vδ3和Vδ5细胞。本发明还涉及这些细胞在过继性T细胞治疗和在嵌合抗原受体疗法中的用途，以及它们在筛查检查点调节剂(checkpoint modulator)的方法中的用途。本发明还涉及作为非造血组织驻留γδT细胞的离体扩增的结果而产生的细胞。

背景技术

在用于癌症的T细胞免疫治疗方面的兴趣日益增加，这些兴趣集中在CD8+(1-4)和CD4+αβ(5，6)T细胞亚群识别癌细胞和介导宿主保护功能潜能的明显能力上，特别是当由PD1(7，8)、CTLA4(9，10)和其他受体(11)发挥的抑制途径的临床介导的拮抗作用而脱阻抑时。尽管如此，依然存在许多问题。例如，似乎有许多主要的临床情景，其中这种治疗的疗效似乎很差(11)；通常存在严重的不良事件(AE)(12)；预测效力或AE的能力非常有限(13)；并且对允许宿主感知肿瘤细胞的相互作用(所谓的“免疫原性”)的解释非常少，其必须优先于传统的抗原特异性CD8+和CD4+αβT细胞应答的激活。

在此方面，许多科学家和临床医生都以同样的方式重新评估γδT细胞的潜力，γδT细胞是具有体细胞生成受体(somatically-generated receptors)的淋巴细胞的第三谱系，其在进化上与αβT细胞和B细胞高度保守。实质上存在人γδT细胞的两个亚群：一个在人外周血中占优势，主要表达Vδ2T细胞受体(TCR)；而另一个在非造血组织中占优势，大多数表达Vδ1TCR，具有表达包含Vδ3或Vδ5链或一些其他非Vδ2链的TCR的较小的群体(14)。

在大多数成人中，Vδ2细胞在稳定状态下仅包含小的且高度可变的血液T细胞成分(0.01-5％)，但细胞迅速扩增，瞬时达到高达约25％的CD3+细胞，随后受到包括许多细菌和寄生虫的广谱试剂挑战(14)。该反应的主要基础是低分子量“磷酸部分”的Vδ2TCR-介导的识别，包括羟基-甲基丁-2-烯基焦磷酸酯(HMBPP)(15)，其是合成胆固醇和合成用于修饰蛋白质(例如通过香叶基化或法尼基化)的其他脂质的关键微生物途径中的中间体。在灵长类中，这种合成通过甲羟戊酸(mevalonate)途径发生，其中一种中间体-异戊烯焦磷酸(IPP)在病毒感染的和转化的细胞中以非常高的水平表达，并且也是Vδ2TCR介导的识别的靶标(16)。

此外，大多数Vδ2T细胞表达高水平的NKG2D受体，其可以在接合NKG2D配体如MICA、MICB和ULBP时(与TCR一起)激活或共刺激细胞的细胞溶解潜力。那些配体是当细胞被暴露于如氧化性的试剂或渗透性应激或紫外线时上调的宿主蛋白质。这些试剂促进表皮生长因子受体(EGFR)途径的超活性信号转导，其通常在人实体瘤中也是失调的(17)。

Vδ2T细胞使用它们的TCR和/或NKG2D检测转化细胞的能力(18-20)、连同它们强大的细胞溶解能力以及将抗原呈递给CD8+T细胞的明显潜力(21)，已经共同引发了Vδ2T细胞可能在临床上被用来递送癌症免疫治疗的观点。这可以通过细胞过继转移来实现，其中认为γδT细胞的衰竭被MHC限制显著且有利地限制了移植物抗宿主病(GvHD)的可能性(22)。为了实现这一点，可以通过添加细胞因子如白介素(IL)-2，连同外源性TCR激活剂如磷酸部分(例如，BrHPP)，或连同抑制甲羟戊酸途径中的法尼基焦磷酸合成酶的临床批准的双膦酸(例如，唑来膦酸)来离体扩增血液驻留Vγ9Vδ2γδT细胞，从而诱导TCR激活部分IPP的累积。然而，通过诸如BrHPP的试剂对Vγ9Vδ2细胞的慢性激活可以逐渐导致细胞耗尽并降低细胞毒性的可能性。