[发明专利]高噪声样品中原位检测核苷酸变体及相关的组合物和方法

权利要求书

1.一种原位检测固定和透性化细胞的样品中目标核酸的单核苷酸变异的方法，包括：

（A）使所述样品与单核苷酸变异探针和邻近探针（NP）接触，其中所述单核苷酸变异探针包含能够与包含所述单核苷酸变异的目标核酸区域特异性杂交的目标锚定片段（SPAT）和前级放大子锚定片段（SPAP），以及其中所述NP包含能够与邻近所述单核苷酸变异探针的结合位点的目标核酸区域杂交的目标锚定片段（NPAT）和NP前级放大子锚定片段（NPAP）；

（B）使所述样品与单核苷酸变异探针前级放大子（SPM）和NP前级放大子（NPM）接触，其中所述SPM包含能够与所述单核苷酸变异探针杂交的片段并包含两个或更多个单核苷酸变异探针协作锚（SPCA），和其中所述NPM包含能够与所述NP杂交的片段并包含两个或更多个NP协作锚（NPCA）；

（C） 使所述样品与协作放大子（COM）接触，其中所述COM包含与所述SPCA互补的第一片段、与所述NPCA互补的第二片段、和包含多个标签放大子锚定片段的第三片段；

（D）使所述样品与标签探针系统（LPS）接触，其中所述LPS包含多个标签放大子（LM）和多个标签探针（LP），其中每个LM包含能够与所述COM的标签放大子锚定片段杂交的片段以及多个标签探针锚定片段，其中每个LP包含可检测标签和与LM的所述标签探针锚定片段杂交的片段，其中上述杂交形成信号发生复合物（SGC），其包含具有所述单核苷酸变异的目标核酸、单核苷酸变异探针、NP、SPM、NPM、多个COM、多个LM和多个LP；和

（E）原位检测所述样品上来自所述SGC的信号，

其中所述SPAT的长度是10到20个核苷酸，所述SPCA的长度是10到20个核苷酸，所述NPCA的长度是10到20个核苷酸。

2.权利要求1的方法，其中所述目标核酸是RNA。

3.权利要求1或2的方法，其中所述固定和透性化细胞是在组织玻片上的。

4.权利要求1-3的任一项的方法，其中所述SPAP的长度是14到28个核苷酸。

5.权利要求1-4的任一项的方法，其中所述单核苷酸变异探针任选地包含所述SPAT和所述SPAP之间的间隔区，其中所述间隔区的长度是1到10个核苷酸。

6.权利要求1-5的任一项的方法，其中所述NPAT的长度是16到30个核苷酸。

7.权利要求1-6的任一项的方法，其中所述NPAP的长度是14到28个核苷酸。

8.权利要求1-7的任一项的方法，其中所述NP任选地包含所述NPAT和所述NPAP之间的间隔区，其中所述间隔区的长度是1到10个核苷酸。

9.权利要求1-8的任一项的方法，其中所述SPM的长度是50到500个核苷酸。

10.权利要求1-9的任一项的方法，其中所述NPM的长度是50到500个核苷酸。

11.权利要求1-10的任一项的方法，其中所述SPM任选地包含两个或更多个SPCA之间的间隔区，其中所述SPCA之间的间隔区的长度独立地是1到10个核苷酸。

12.权利要求1-11的任一项的方法，其中所述NPM任选地包含两个或更多个NPCA之间的间隔区，其中所述NPCA之间的间隔区的长度独立地是1到10个核苷酸。

13.权利要求1-12的任一项的方法，其中所述COM的长度是60到900个核苷酸。

14.权利要求1-13的任一项的方法，其中所述COM任选地包含所述第一、第二和/或第三片段之间的间隔区，其中所述第一、第二和/或第三片段之间的间隔区的长度独立地是1到10个核苷酸。