[发明专利]用于表达蛋白质的系统和方法

权利要求书

1.一种产生表达膜结合蛋白的囊泡的方法，包括：

a)使哺乳动物细胞与编码膜结合蛋白的核酸接触，所述膜结合蛋白选自ABCB1，ABCB4，ABCB11，ABCC1，ABCC2，ABCC3，ABCC4，ABCC5，ABCC6，ABCG2和其同源物；

b)电穿孔所述哺乳动物细胞使得所述核酸进入所述哺乳动物细胞；和

c)分离表达感兴趣的所述膜结合蛋白的囊泡。

2.如权利要求1所述的方法，还包括在所述电穿孔步骤之后培养所述细胞的步骤。

3.如权利要求2所述的方法，其中所述培养包括添加丁酸钠。

4.如权利要求1-3中任一项所述的方法，其中所述分离步骤包括所述细胞的均质化。

5.如权利要求1-4中任一项所述的方法，其中所述膜结合蛋白包含与天然形式的该膜结合蛋白相似的翻译后修饰。

6.如权利要求1-5中任一项所述的方法，其中所述哺乳动物细胞是HEK293，CHO，Hela，S2，MDCK-1，MDCK-II，LLC-PK1，Caco-2，Huh7或V79细胞。

7.如权利要求1-6中任一项所述的方法，还包括使所述囊泡与测试化合物接触的步骤。

8.如权利要求7所述的方法，其中所述测试化合物是药物。

9.一种筛选测试化合物的方法，包括：

a)使哺乳动物细胞与编码转运蛋白的核酸接触，所述转运蛋白选自ABCB1，ABCB4，ABCB11，ABCC1，ABCC2，ABCC3，ABCC4，ABCC5，ABCC6，ABCG2和其同源物；

b)电穿孔所述哺乳动物细胞使得所述核酸进入所述哺乳动物细胞；

c)分离表达所述转运蛋白的细胞膜；和

d)使所述细胞膜与所述测试化合物接触。

10.如权利要求9所述的方法，还包括测定由所述转运蛋白对所述测试化合物的转运的步骤。

11.如权利要求10所述的方法，其中所述测定包括测定转运的动力学。

12.如权利要求9-11中任一项所述的方法，还包括使所述细胞膜与所述药物转运体的抑制剂接触并测定所述抑制剂对所述药物转运体的活性或转运的抑制的步骤。

13.一种通过权利要求1-6中任一项所述方法生产的分离的囊泡。

14.一种产生含有感兴趣蛋白质的细胞级分的方法，包括：

a)使哺乳动物细胞与编码药物代谢酶的核酸接触，所述药物代谢酶选自：细胞色素P450，醛氧化酶(AO)，黄素单加氧酶(FMO)，单胺氧化酶A和B(MAO A和B)，酯酶，N-乙酰转移酶(NAT)，磺基转移酶(SULT)，尿苷5'-二磷酸葡糖醛酸基转移酶(UGT)，及其同源物；

b)电穿孔所述哺乳动物细胞使得所述核酸进入所述哺乳动物细胞；和

c)分离含有所述药物代谢酶的细胞级分。

15.如权利要求14所述的方法，其中所述细胞色素P450选自：CYP1A1，CYP1B1，CYP2A6，CYP2B6，CYP1A2，CYP2C8，CYP2C9，CYP2C18，CYP2C19，CYP2D6，CYP2E1，CYP3A5，CYP3A7，CYP3A4，CYP4F2和CYP2J2。

16.如权利要求14所述的方法，其中所述酯酶选自羧酸酯酶1(CES1)，羧酸酯酶2(CES2)，对氧磷酶1(PON1)，羧基亚甲基丁烯酸内酯酶(CMBL)，丁酰胆碱酯酶(BChE)，芳基乙酰胺脱乙酰酶(AADAC)和碱性磷酸酶(AP)。