[发明专利]用pH梯度法从动物或人体血浆或从植物中分离蛋白质的方法

说明书

本发明涉及一种使用pH调节来分离血浆蛋白质的方法，所述方法包括以下步骤：在注射用水中复原组分III、组分IV或血浆糊状物；调节pH值到1，温度从1℃～30℃；在2～8℃下以6000rpm离心所得的悬浮液20分钟；收集得到的糊状物1(P1)和上清液1(S1)；复原WFI中的P1并将pH调节至2；并重复步骤3)～步骤5)直至上清液的pH达到14。根据该方法，从血浆组分III和组分IV制备免疫球蛋白的新制剂。

相关申请的交叉引用

本申请要求于2015年9月28日提交的第62/233,913号美国临时专利申请的权益。上述专利申请通过引用整体并入本文以提供发明的连续性。

技术领域

本主题涉及一种血浆分离的方法，并且更具体地涉及一种使用pH梯度法分离血浆以分离蛋白质的方法。

背景技术

除生产白蛋白之外，科恩冷分离方法(“Cohn方法”)通常用于将血浆分离成多种医学上有用且重要的蛋白质组分。科恩方法涉及修改pH值、乙醇浓度和温度，以通过沉淀将蛋白质分离成五种“组分”。然后分离的蛋白质经历广泛的纯化过程，包括冷冻沉淀、纳滤、溶剂洗涤剂处理以及温育，以产生无菌的、病毒灭活的蛋白质产物。

特别地，免疫球蛋白G(IgG)是一种抗体并且是由四条肽链组成的蛋白质复合物-以抗体单体典型的Y形排列的两条相同的重链和两条相同的轻链。每个IgG具有两个抗原结合位点。代表人类约75％的血清抗体，IgG是循环系统中最常见的抗体类型。IgG分子通常由血浆B细胞产生和释放。抗体是体液免疫的主要组成部分。IgG是血液和细胞外液中发现的主要抗体类型，用于控制身体组织的感染。IgG通过与多种病原体如病毒、细菌和真菌结合来保护身体免受感染。在血浆衍生的工业中，IgG通常从组分II的人血浆中纯化。然而，可以从组分III糊剂中沉淀出一定百分比的IgG，其包括34种现有和新发现的蛋白质，以及55种在血浆组分中新发现的蛋白质。

通常，组分IV是血浆衍生产品工业中的丢弃组分。它主要含有人体白蛋白、载脂蛋白、转铁蛋白、α1抗胰蛋白酶触珠蛋白、波形蛋白和新发现的蛋白质。一种特殊的产品，AFOD，含有15种人类蛋白质，其中在血浆组分中有4种新发现的蛋白质。

发明内容

鉴于上述情况已经做出本发明主题，并且本主题的目的是提供一种使用pH调节来分离动物或人血浆组分III、组分IV、血浆或植物的蛋白质的方法。本主题提供了一种使用pH调节和注射用水(WIL)而不使用酒精或其他缓冲液来分离血浆组分的蛋白质的方法。本主题的使用简化了用于分离血浆组分的过程并且通过常规方法例如Cohn方法来防止蛋白质变性。

根据本主题的一个实施方案，提供了使用pH梯度法从动物或人血浆组分III、组分IV、血浆或植物中分离蛋白质的方法。因此，可以从组分III制备免疫球蛋白的新制剂，其具有34种现有的和未知的新发现的蛋白质，其中14种是新发现的蛋白质，而55种新发现的蛋白质在血浆组分中。本主题不仅可以阻止丙型肝炎病毒的复制，而且可以杀死丙型肝炎病毒并最终根除丙型肝炎病毒感染。

在本主题的另一个实施方案中，提供了一种用pH调节来分离血浆组分IV的方法。因此，可以使用本方法从组分IV制备含有15种人蛋白质(其中有4种新发现的蛋白质)的AFOD和其他产品的新制剂。本主题不仅可以阻止HIV-1和HIV-2病毒的复制，还可以杀死HIV-1和HIV-2病毒，并最终根除HIV-1和HIV-2病毒感染。

本主题的一个实施方案涉及使用pH梯度法从血浆组分中分离蛋白质的方法，其包括以下步骤：

a.在注射用水中复原组分III、组分IV或血浆糊状物；

b.调节pH值至1，温度为1℃～30℃形成悬浮液；

c.在2～8℃以6000rpm离心所得的悬浮液20分钟；

d.收集产生的糊状物(P1)和上清液1(S1)；