[发明专利]生产高纯度硫酸化HA的改进方法

说明书

本发明涉及一种生产高纯度和硫酸化度为1‑3的硫酸化透明质酸(HA)、硫酸化HA‑衍生物和/或其混合物的改进方法，包括以下步骤：在有机磺酸存在下，将HA‑Na或HA‑衍生物‑Na溶解在非质子溶剂中；b)通过加入过量的硫酸化剂使获得的溶液硫酸化；c)在乙醇中进行沉淀直到获得沉淀物；d)在过量的NaCl存在下，将获得的沉淀物溶解在水和步骤a)中使用的非质子溶剂的混合物中，调节pH至3‑4的范围内；e)进一步用乙醇进行沉淀直到获得粉末；f)洗涤来自步骤e)的粉末并在真空下干燥由此获得的产物。本发明还涉及如此制备的高纯度和硫酸化度为1‑3的硫酸化HA、硫酸化HA‑衍生物和/或其混合物，以及相关的药物混合物。

技术领域

本发明涉及用于生产高纯度硫酸化HA的改进方法。

长久以来，人们都知道化学衍生化透明质酸(HA)的可能性，以获得保持起始分子的物理化学性质的结构，并获得新的特定特征。简而言之，HA是由D-葡糖醛酸和N-乙酰基-D-葡糖胺的交替残基构成的杂多糖，其为直链，分子量可以为50,000-13x 10⁶Da，这取决于其获得的来源以及所用的制备方法。

透明质酸在人体中几乎无处不在，其中它起着重要的作用，而不仅仅是作为许多组织细胞的机械支持，例如皮肤、肌腱、肌肉和软骨。HA与其膜受体CD44以及与阿片受体的相互作用也是已知的。

由于其化学性质，HA具有许多可衍生的官能团。在这种情况下，在本领域技术人员已知的各种可能的改性中，本发明感兴趣的改性是硫酸化，即用-SO₃基团富集。这种衍生化可以针对大量可用的-OH基团(O-硫酸化)和N-乙酰基-D-葡糖胺残基在其脱乙酰化之后的胺基团(N-硫酸化)来进行(EP 702699；EP 940410；EP 971961；EP 889055)。不同的衍生化使分子适合各种用途；事实上，N-硫酸化衍生物对于医疗器械的生产特别有用。硫酸化产物的性质还取决于硫酸化程度，以每个二糖单元存在的-SO₃基团的数目表示。

用于本发明目的的感兴趣的透明质酸硫酸化衍生物是O-硫酸化衍生物，其在本专利申请中简单地表示为HAS，并且其能够容易地穿过皮肤屏障，促进与之相关联的物质的通过。这些特性使其成为药理学和生物活性分子的皮肤吸收的极好载体。硫酸化也赋予透明质酸HA例如在血管支架涂层中已被开发的抗凝血肝素样性质。

最近还发现并证明HAS具有实际的药理学性质：它是一种强有力的抗炎剂，通过有效调节许多细胞因子的活性来发挥其作用，这些细胞因子包括促炎和抗炎细胞因子。由此，HAS可用于治疗由细胞因子水平改变介导的多种疾病(类风湿性关节炎、哮喘、全身性和皮肤自身免疫性疾病、病毒感染、特应性皮炎、湿疹、白癜风、淋巴瘤等)(WO2010130468；WO2010130466)。

目前已知用于生产HA的方法是特征在于相对有限的生产率和严格需要透析阶段的强制纯化步骤的方法。

因此，潜在如此巨大的HA和/或其硫酸化衍生物的治疗用途也产生了本发明提出要解决的生产性问题，即寻找生产硫酸化HA和/或其硫酸化衍生物的方法，其在时间和原材料方面更快速、更少消耗，并且重要的是尤其对于最终产品的加工产率和纯度而言特别有效。

发明概述

因此，本发明的目的涉及用于生产高纯度和硫酸化度为1-3的硫酸化透明质酸(HA)、硫酸化HA-衍生物和/或其混合物的改进方法，其中所述方法包括以下步骤：

a)在量为相对于HA或HA衍生物的重复二糖单元4.5-5.5摩尔/摩尔当量的有机磺酸，优选甲磺酸的存在下，将HA-Na或HA衍生物-Na溶解在优选选自二甲亚砜(DMSO)、N，N-二甲基甲酰胺(DMF)或N-甲基吡咯烷酮(NMP)，更优选DMSO的非质子溶剂中；