[发明专利]细胞扩增方法和治疗组合物

说明书

本发明涉及用于生产间充质干细胞(MSC)的方法，特别涉及用于大规模生产用于治疗人和其他动物的各种疾病的MSC(例如同种异体MSC)的方法。本发明还涉及允许选择适于大规模生产MSC的优选供体细胞的方法。本发明还涉及通过本发明的方法制备的纯化MSC。本发明还涉及血小板溶解产物在用于制备MSC培养物的方法中的用途以及富集细胞外基质的分泌物的制备。本发明还涉及用于制备包含一种或更多种从培养的MSC中分泌的组分的组合物的方法，所述组分具有改进的稳定性特征。本发明还涉及通过施用富集高分子量糖缀合物的条件培养基来治疗炎性病况(包括减轻其疼痛)的方法，并且涉及通过施用富集高分子量糖缀合物的条件培养基来治疗神经性疼痛的方法。

技术领域

本发明涉及用于生产间充质干细胞(MSC)的方法，特别涉及用于大规模生产用于治疗人和其他动物的各种疾病的MSC的方法。在具体实施方案中，所述方法允许有效大规模生产用于疗法的同种异体MSC。本发明还涉及允许选择适于大规模生产MSC的优选供体细胞的方法。本发明还涉及通过本发明方法制备的纯化的MSC。本发明还涉及血小板溶解产物在用于制备MSC培养物的方法中的用途以及富集细胞外基质的分泌物的制备。本发明还涉及用于制备包含一种或更多种从培养的MSC中分泌的组分(例如血管内皮生长因子(VEGF))的组合物的方法，所述组分具有改进的稳定性特征。本发明还涉及通过施用富集高分子量糖缀合物的条件培养基来治疗炎性病况(包括减轻其疼痛)的方法。本发明还涉及通过施用富集高分子量糖缀合物的条件培养基来治疗神经性疼痛的方法。

背景技术

使用同种异体间充质干细胞(MSC)治疗人和动物的各种疾病是许多群体感兴趣的快速扩展的领域。目前，有大量的临床试验探索使用MSC用于治疗各种疾病，包括骨关节炎、心肌梗塞、中风和明显有免疫系统参与的其他疾病，例如移植物抗宿主病、克罗恩氏病(Crohn's disease)、类风湿性关节炎和糖尿病。MSC正被用作细胞疗法，以治疗骨和软骨中的缺陷并帮助伤口愈合，或者与生物材料组合用于组织工程开发。

对于同种异体间充质干细胞的商业生产，重要的是来自单个供体的细胞可被充分扩增以产生大量剂量。尽管存在用于生产适用于疗法的MSC的已知方法，但在将此类方法应用于大规模生产MSC方面存在限制。例如，一种限制在于用于建立培养物的不同组织样品或细胞样品之间存在增殖能力的不一致性，以致一个供体样品可能具有更多细胞倍增的能力由此适于细胞的大规模制备，而另一供体样品可能具有有限的能力且不适合。目前没有可靠的手段，使用者通过该手段能够在早期阶段区分此类样品，结果是在已实现可接受数目的剂量之前，来源于一个样品的细胞可能变得衰老，从而导致浪费精力和资源。

除了使用同种异体间充质干细胞(MSC)治疗人和动物的各种疾病之外，使用来自MSC的分泌物来治疗各种疾病的兴趣也在扩大。分泌物可呈各种形式，例如申请人的共同未决申请PCT国际公开号WO2013/040649中所描述的，该申请名称为“治疗方法和组合物(Therapeutic methods and compositions)”，其内容以引用方式并入本文。

在本文所描述的实施方案中，本发明解决了对生产MSC和基于MSC的产品的改进方法的需要，特别是改善当已知方法应用于大规模生产MSC(例如用于生产大量剂量的同种异体细胞)时的一种或更多种限制的方法。在实施方案中，本发明解决了对生产包含MSC分泌的细胞因子和生长因子的组合物的改进的方法以及对此类组合物的需要，所述改进的方法或组合物可减轻已知方法和组合物的一种或更多种限制，例如易用性、组合物在储存时的稳定性或治疗能力。

在实施方案中，本发明解决了对用于治疗炎性病况(包括减轻其疼痛)的改进的或替代的方法和药剂的需要。在实施方案中，本发明解决了对用于治疗神经性疼痛的改进的或替代的方法和药剂的需要。

发明内容

本发明人已开发出使得能够从单个供体生产非常大量剂量的MSC的方法。所述方法涉及首先从供体收获大量脂肪组织。然后消化脂肪抽吸物(lipoaspirate)以分离基质血管级分(SVF)，然后将其置于组织培养物中并扩增。