[发明专利]免疫球蛋白结合多肽

说明书

本发明的目的在于，提供一种多肽，其通过改变源自大消化链球菌的蛋白L中的免疫球蛋白结合结构域的氨基酸序列，对免疫球蛋白的Kappa链的结合能力高，碱稳定性优异。在源自大消化链球菌3316株的蛋白L的各免疫球蛋白结合结构域中，通过将特定的赖氨酸残基取代为碱性氨基酸或具有羟基的氨基酸，可得到对免疫球蛋白的Kappa链的结合能力高且碱稳定性优异的多肽。

技术领域

本发明涉及一种与免疫球蛋白或其片段结合的多肽。更具体而言，本发明涉及一种对免疫球蛋白或其片段的Kappa链的结合性高、碱条件下的稳定性(碱稳定性)优异的多肽。进而，本发明涉及一种该多肽的制造方法、该多肽的固定化物、及利用了该多肽的免疫球蛋白或其片段的分离方法等。

背景技术

目前，免疫球蛋白(也称为抗体)对靶物质的结合特异性高，作为研究用试剂或临床检查试剂被广泛利用。另外，近年来，通过基因重组技术的进步，确立人抗体或人源化抗体的制作技术，免疫球蛋白作为抗体药物在风湿病或癌等医疗领域中已经实现了实用化。

免疫球蛋白主要通过动物细胞培养而制造，在其纯化中广泛利用使用具有免疫球蛋白结合能力的配体的亲和色谱。在利用于免疫球蛋白的纯化的亲和色谱中，作为与免疫球蛋白特异性地结合的配体，可使用蛋白A、蛋白L、蛋白G等多肽或这些的免疫球蛋白结合结构域。

另一方面，近年来，要求免疫球蛋白的纯化所使用的配体的稳定性的提高。特别是在免疫球蛋白的纯化中，为了使病毒等失活、清洗固定化有配体的载体等而使用碱溶液，在免疫球蛋白的纯化所使用的配体中，相对于碱具备高的稳定性成为1个重要的要素。

目前，关于使蛋白A的碱稳定性提高的技术，深入地进行了研究。例如，专利文献1中报道有：通过取代蛋白A的C结构域的特定的氨基酸或蛋白A的Z结构域的特定的氨基酸残基，可具备优异的免疫球蛋白结合能力及碱稳定性。另外，专利文献2中报道有：通过将蛋白A的天冬酰胺残基取代为其它氨基酸，可具备碱稳定性。

这样，关于蛋白A已经报道有各种赋予碱稳定性的技术，但是，关于赋予蛋白L的碱稳定性的技术，现状是尚未进行充分的研究。

已知有蛋白L定位于大消化链球菌(Peptostreptococcus magnus)(别名Finegoldia magna)的细胞表面，可以特异性地结合于免疫球蛋白的Kappa链。就蛋白L而言，报道有源自大消化链球菌312株的物质(非专利文献1)和源自大消化链球菌3316株的物质(非专利文献2及专利文献3)。就源自大消化链球菌3316株的蛋白L而言，有与免疫球蛋白的Kappa链结合的4个结构域(非专利文献2及专利文献3)，已知这些结构域彼此间的氨基酸序列的类似性高，而且这4个结构域单独时也显示对免疫球蛋白的结合能力。312株的5个Kappa链结合结构域的氨基酸序列相对于3316株的各结构域的氨基酸序列的类似性也高。但是，在源自大消化链球菌的蛋白L的各结构域的氨基酸序列中，关于怎样的改变有助于碱稳定性完全不清楚。

现有技术文献

专利文献

专利文献1：国际公开号第2007/097361号

专利文献2：国际公开第2000/023580号

专利文献3：US patent No.6,162,903(2000)

非专利文献

非专利文献1：W.Kastern et al.，J.Biol.Chem.(1992)267，12820-12825

非专利文献2：J.P.Murphy et al.，Mol.Microbiol.(1994)12，911-920

发明内容

发明所要解决的问题