[发明专利]产生包含种系遗传修饰的动物的方法

权利要求书

1.一种用于产生包含靶向种系遗传修饰的非人类动物的方法，所述方法包括：

(i)向精子递送可编程核酸酶；

(ii)用所述精子使卵子受精，和

(iii)从所述卵子产生动物，

其中所述核酸酶将遗传修饰引入精子和/或卵子的DNA中。

2.权利要求1的方法，其进一步包括筛选得自步骤(iii)的动物的种系遗传修饰。

3.权利要求1或权利要求2的方法，其中所述核酸酶在包含转染剂的组合物中递送至所述精子。

4.权利要求1至3任一项的方法，其中所述核酸酶选自：RNA向导的工程核酸酶(RGEN)、类转录激活因子核酸酶(TALEN)和锌指核酸酶(ZFN)。

5.权利要求4的方法，其中所述核酸酶是RNA引导的工程核酸酶(RGEN)。

6.权利要求2至5任一项的方法，其中所述转染剂包含阳离子脂质。

7.权利要求6的方法，其中所述转染剂包含选自以下的一种或多种单价阳离子脂质：DOTMA(N-[1-(2,3-二油酰氧基)-丙基]-N.N.N-三甲基氯化铵)、DOTAP(1,2-双(油酰基氧基)-3-3-(三甲基铵)丙烷)、DMRIE(1,2-二肉豆蔻基氧基丙基-3-二甲基-羟乙基溴化铵)和DDAB(二甲基双十八烷基溴化铵)。

8.权利要求6或权利要求7的方法，其中所述转染剂包含选自以下的一种或多种多价阳离子脂质：DOSPA(2,3-二油酰氧基-N-[2-(精胺羧酰胺)乙基]-N,N-二甲基-1-丙胺三氟乙酸盐)和DOSPER(1,3-二油酰氧基-2-(6-羧基精胺基)-丙酰胺、TMTPS(四甲基四棕榈酰精胺)、TMTOS(四甲基四油烯基精胺)、TMTLS(四甲基四月桂基精胺)、TMTMS(四甲基四肉豆蔻基精胺)和TMDOS(四甲基二油烯基精胺)。

9.权利要求1至8任一项的方法，其中所述遗传修饰导致所述动物和/或其子代中一种或多种基因和/或蛋白质的降低的表达。

10.权利要求1至9任一项的方法，其中所述遗传修饰是缺失、取代或插入。

11.权利要求10的方法，其中所述插入是转基因。

12.权利要求1至11任一项的方法，其中步骤(ii)包括将所述精子人工授精至雌性动物。

13.权利要求1至12任一项的方法，其中使用所述方法产生的至少10％的动物包含所述靶向种系遗传修饰。

14.权利要求1至13任一项的方法，其中所述动物的所有细胞包含所述靶向种系遗传修饰。

15.权利要求1至14任一项的方法，其中所述动物对于靶向种系遗传修饰是杂合的。

16.权利要求1至15任一项的方法，其中所述靶向种系遗传修饰修饰所述动物的性状。

17.权利要求1至16任一项的方法，其中所述动物是禽类。

18.权利要求17的方法，其中所述禽类选自鸡、鸭、火鸡、鹅、矮脚鸡或鹌鹑。

19.一种通过权利要求1至18任一项的方法产生的动物或其子代。

20.精子或卵子，由权利要求19的动物产生。