[发明专利]使用基于核酸引导的核酸酶的系统捕获核酸

权利要求书

1.一种捕获感兴趣的靶DNA序列的方法，其包括：

(a)使所述样品与多个核酸引导的核酸酶切口酶-gNA复合物接触，其中所述gNA与所述DNA序列的子集中感兴趣区域侧翼的感兴趣的靶定位点互补，由此产生多个在邻近所述感兴趣区域的位点处带切口的DNA；

(b)将所述样品加热至65℃，由此引起非常接近的切口产生双链断裂；

(c)使所述双链断裂与热稳定的连接酶接触，由此允许仅在这些位点连接衔接子序列；和

(d)重复步骤a-c在感兴趣区域的另一侧放置第二衔接子，从而允许富集感兴趣区域。

2.权利要求1的方法，其中所述gNA是gRNA。

3.权利要求1的方法，其中所述gNA是gDNA。

4.权利要求1至3中任一项的方法，其中所述核酸引导的核酸酶切口酶选自以下各项组成的组：CAS I类I型切口酶、CAS I类III型切口酶、CAS I类IV型切口酶、CAS II类II型切口酶和CAS II类V型切口酶。

5.权利要求1至3中任一项的方法，其中所述核酸引导的核酸酶切口酶选自以下各项组成的组：Cas9切口酶、Cpf1切口酶、Cas3切口酶、Cas8a-c切口酶、Cas10切口酶、Cse1切口酶、Csy1切口酶、Csn2切口酶、Cas4切口酶、Csm2切口酶、Cmr5切口酶、Csf1切口酶、C2C2切口酶和NgAgo切口酶。

6.权利要求1的方法，其中所述DNA是双链DNA。

7.权利要求6的方法，其中所述双链DNA来自基因组DNA。

8.权利要求7的方法，其中所述基因组DNA是人的。

9.权利要求1至8中任一项的方法，其中所述DNA序列的长度为20bp至5000bp。

10.权利要求1至9中任一项的方法，其中所述感兴趣的靶定位点是单核苷酸多态性(SNP)、短串联重复(STR)、癌基因、插入物、删除、结构变异、外显子、基因突变或调控区。

11.权利要求1至10中任一项的方法，其中所述感兴趣的靶定位点代表少于50％的所述样品中的总DNA。

12.权利要求1至11中任一项的方法，其中所述样品获自生物样品、临床样品、法医样品或环境样品。

13.权利要求1至11中任一项的方法，其中能够接触双链断裂的热稳定的连接酶是热稳定的5’App DNA/RNA连接酶或T4 RNA连接酶。

14.权利要求1至13中任一项的方法，其中所述核酸引导的核酸酶切口酶在所述DNA序列的5'端产生切口。