[发明专利]用于催化性测定的方法和组合物

权利要求书

1.包括以下的方法：

(a)使第一组分寡核苷酸和第二组分寡核苷酸与促进剂核酸和底物核酸杂交以形成催化活性核酸酶，其中第一组分寡核苷酸包含促进剂特异性序列、底物特异性序列和位于所述促进剂特异性序列与所述底物特异性序列之间的部分催化核心序列，并且其中所述第二组分寡核苷酸包含促进剂特异性序列、底物特异性序列和位于所述促进剂特异性序列与所述底物特异性序列之间的部分催化核心序列；

(b)用所述催化活性核酸酶在切割位点切割所述底物核酸以形成所述底物核酸的5’片段和3’片段；

(c)使所述底物核酸的5’片段与捕获探针杂交，其中所述捕获探针包含与所述底物核酸的5’-片段互补的第一区域、提供与所述底物核酸的5’-片段的3’-末端核苷酸之错配的第二区域、以及提供用于从所述底物核酸的5’-片段的3’-端进行核酸合成之模板序列的第三区域；

(d)从所述底物核酸的5’-片段移除所述3’-末端核苷酸以形成所述底物核酸的可延伸5’-片段；以及

(e)沿着所述捕获探针延伸所述底物核酸的可延伸5’-片段；以及

(f)对双链延伸产物进行解链分析，所述双链延伸产物是通过沿着所述捕获探针延伸所述底物核酸的可延伸5’-片段形成的。

2.权利要求1所述的方法，其中所述底物核酸包含脱氧核糖核苷酸和核糖核苷酸。

3.权利要求1所述的方法，其中所述底物核酸包含一个或更多个非天然核苷酸。

4.权利要求1所述的方法，其中所述底物核酸包含荧光团和淬灭剂，其中所述荧光团和淬灭剂位于所述切割位点的不同侧。

5.权利要求1所述的方法，其中所述底物核酸还包含在其5’端的尾部区，其中所述尾部区与所述捕获探针互补并且不与所述第一或第二组分寡核苷酸互补。

6.权利要求5所述的方法，其中所述尾部区包含一个或更多个非天然核苷酸。

7.权利要求5所述的方法，其中所述底物核酸与所述第一和第二组分寡核苷酸的Tm大于所述底物核酸的5’片段与所述捕获探针的Tm，所述底物核酸的5’片段与所述捕获探针的Tm大于所述底物核酸的5’片段与所述第一和第二组分寡核苷酸的Tm。

8.权利要求1所述的方法，其中所述底物核酸的切割位点包含一个或两个核糖核苷酸。

9.权利要求1所述的方法，其中所述第一组分寡核苷酸的促进剂特异性序列包含与所述促进剂核酸互补的约10至20个核苷酸或6至24个核苷酸。

10.权利要求1所述的方法，其中所述第二组分寡核苷酸的促进剂特异性序列包含与所述促进剂核酸互补的约10至20个核苷酸或6至24个核苷酸。

11.权利要求1所述的方法，其中所述第一组分寡核苷酸的部分催化核心序列包含约2至12个核苷酸。

12.权利要求1所述的方法，其中所述第二组分寡核苷酸的部分催化核心序列包含约2至12个核苷酸。

13.权利要求1至12中任一项所述的方法，其中所述核苷酸是脱氧核糖核苷酸、核糖核苷酸、非天然核苷酸或其任何组合。

14.权利要求1所述的方法，其中所述捕获探针包含荧光团或淬灭剂。

15.权利要求1所述的方法，其中通过DNA聚合酶的3’-外切核酸酶活性从所述底物核酸的5’-片段移除所述3’-末端核苷酸。