[发明专利]用于制备源自血浆的乙型肝炎免疫球蛋白的方法

权利要求书

1.一种用于制备源自人血浆的乙型肝炎免疫球蛋白制剂的方法，其包括以下步骤：

(a)溶解含有源自人血浆的乙型肝炎免疫球蛋白的血浆蛋白组分II，其从患有乙型肝炎的或使用乙型肝炎疫苗另外免疫的健康供体收集，然后通过过滤获得组分II溶液；

(b)渗析和/或浓缩获得的组分II溶液，使经渗析和/或浓缩的溶液经过pH为5.5-7.0的阴离子交换色谱，然后回收未附着于用来进行阴离子交换色谱的柱的组分；

(c)使用溶剂和/或洗涤剂处理回收的组分以灭活病毒，并且使经处理的组分经过pH为5.0-6.5的阳离子交换色谱以去除所述溶剂和/或洗涤剂和血栓形成物质；

(d)渗析和/或浓缩从所述阳离子交换色谱获得的洗出液；

(e)过滤所述经渗析和/或浓缩的溶液，从而获得人乙型肝炎免疫球蛋白；

(f)向所述人乙型肝炎免疫球蛋白加入稳定剂，并且在加入所述稳定剂之后将所述免疫球蛋白溶液的pH调节至3.5-4.5；和

(g)使所述pH调节的免疫球蛋白溶液进行细菌过滤，并且在所述细菌过滤后将所述免疫球蛋白溶液的pH调节至4.0-4.5，

其中所述步骤(b)的阴离子交换色谱使用基于二乙氨基乙基(DEAE)的阴离子交换树脂，并且

其中所述步骤(c)中的阳离子交换色谱使用基于Sephardex的阳离子交换树脂。

2.权利要求1的方法，其中所述步骤(a)中的血浆蛋白组分II的溶解通过加入相当于所述血浆蛋白组分体积2-10倍的量的氯化钠溶液进行。

3.权利要求1的方法，其中所述步骤(a)中的过滤是澄清过滤，并且通过将pH调节至4.5-5.5进行。

4.权利要求1的方法，其中所述步骤(b)中的渗析和/或浓缩在10mOsmol/kg或更低的渗透压进行，然后将pH调节至5.5-6.5。

5.权利要求1的方法，其中所述步骤(b)中的阴离子交换色谱回收非吸附溶液。

6.权利要求1的方法，其中所述步骤(b)中的阴离子交换色谱在5.5-7.0的pH和30-150cm/小时的流速进行，并且所述未附着于阴离子交换色谱柱的组分以1.0-2.0负载量(LV)回收。

7.权利要求1的方法，其中所述溶剂是磷酸三(正丁基)酯(TNBP)，并且所述洗涤剂是选自聚山梨醇酯80、Triton X-100和Triton X-45中的至少一种。

8.权利要求1的方法，其中所述步骤(c)中的阳离子交换色谱在500-1,500mM的盐浓度进行。

9.权利要求1的方法，其中所述步骤(d)中的渗析和/或浓缩在10mOsmol/kg或更低的渗透压进行。

10.权利要求1的方法，其中所述步骤(e)中的过滤在1.5-2.5巴的压力使用纳米过滤系统进行。

11.权利要求1的方法，其中所述稳定剂是选自糖醇、麦芽糖、山梨糖醇、甘露糖、葡萄糖、海藻糖、白蛋白、赖氨酸、甘氨酸、PEG和吐温80中的至少一种。

12.权利要求1的方法，其中加入所述稳定剂，使得最终浓度是90-110g/l。