[发明专利]用于制备源自血浆的乙型肝炎免疫球蛋白的方法

说明书

本发明涉及一种源自人血浆的乙型肝炎免疫球蛋白制剂的制备方法。更具体地，本发明涉及一种源自人血浆的乙型肝炎免疫球蛋白制剂的制备方法，其特征在于含有人乙型肝炎免疫球蛋白的血浆蛋白组分II(组分II)被渗析浓缩，然后通过阴离子交换树脂和阳离子交换树脂纯化技术去除产生血栓的物质和在过程中形成的杂质。通过使用根据本发明的源自人血浆的乙型肝炎免疫球蛋白制剂的制备方法，去除杂质和产生血栓的物质的效率增加，并且保持了聚合物含量，由此可能产生稳定和改善质量的人乙型肝炎免疫球蛋白。

技术领域

本发明涉及一种用于制备源自人血浆的乙型肝炎免疫球蛋白制剂的方法，并且更具体地涉及一种用于制备源自人血浆的乙型肝炎免疫球蛋白制剂的方法，其包括：渗析和浓缩含有源自人血浆的乙型肝炎免疫球蛋白的血浆蛋白组分II；通过阴离子交换树脂和阳离子交换树脂纯化技术去除血栓形成物质和过程中的杂质；有效去除在病毒灭活过程中加入的溶剂和洗涤剂；以及进行纳米过滤和加入稳定剂以增加免疫球蛋白的稳定性。

背景技术

免疫球蛋白，即含有针对各种病毒和细菌的抗体的血浆蛋白，用作通过向自然缺乏抗体的受试者或由于病毒或细菌疾病而需要人工补充抗体的患者施用而预防或治疗疾病的药物。

为了将这种免疫球蛋白用作药物，根据由Cohn和Oncley开发的冷乙醇分馏工艺(Cohn E.et al.,J.Am.Chem.Soc.,68:459,1946)或由Kistler和Nitschmann开发的经修改的冷乙醇分馏工艺(Kistler P,Nitschmann HS,Vox Sang,7:414.1952)已经制备了用于皮下或肌内注射的免疫球蛋白。

然而，用于肌内注射的免疫球蛋白具有以下问题：1)这种免疫球蛋白的剂量是有限的，使得不可能大量施用免疫球蛋白；2)免疫球蛋白导致注射有免疫球蛋白的部位的疼痛；3)免疫球蛋白具有低含量的有抗体活性的天然免疫球蛋白G(IgG)；4)免疫球蛋白的抗体活性被注射部位的蛋白酶降低；和5)达到峰值血药浓度耗费的时间是24小时或更久。

为了解决肌内注射的问题，尝试通过静脉内注射施用免疫球蛋白。然而，当免疫球蛋白制剂静脉内施用时，由于具有抗补体活性的聚集体引起的严重副作用(过敏反应)，出现各种直接的副作用，包括呼吸困难和循环系统休克。这种症状主要出现在免疫球蛋白缺乏的患者中。具体地，在其中出现抗IgA抗体的患者种观察到严重超敏反应的副作用。

换言之，为了开发静脉内制剂，应当去除杂质，诸如凝血因子(纤维蛋白原、白蛋白、前激肽释放酶激活剂(PKA)和转铁蛋白)或类似于乙型肝炎免疫球蛋白的免疫球蛋白诸如IgA和IgE，并且需要增加稳定性和纯度。

因此，由于上述问题，免疫球蛋白的静脉内注射是不可能的，需要开发用于静脉内注射的免疫球蛋白制剂，并且已经开发了在制备过程中能够去除上述聚集体和/或防止聚集体形成的方法。由于使用蛋白酶诸如胃蛋白酶、木瓜蛋白酶或纤溶酶，或者化学物质诸如β-丙内酯处理免疫球蛋白来改变它们的结构从而抑制免疫球蛋白聚集体的形成或破坏免疫球蛋白聚集体，免疫球蛋白的静脉内注射已经成为可能，从而降低免疫球蛋白的抗补体活性。

第一代静脉内注射免疫球蛋白(IVIG)产品通过使用胃蛋白酶处理起始原料(Cohn组分II)来制备以去除免疫球蛋白聚集体。制备过程不包括柱色谱步骤，并且将制备的产品冻干，以便在适当的时间段内稳定保持，并且在使用前立即将其溶解。然而，发现由一些制造商制造的IVIG产品导致病毒感染诸如病毒性丙型肝炎。因此，灭活和/或去除已知病毒的一个或多个步骤被加入到制备过程中。此后，具有低抗补体活性和较高稳定性的第二代IVIG产品在1980年代中期被公开，并且IVIG产品通过一些色谱步骤来纯化。

这种制剂是静脉内注射的，并且因此克服了肌内免疫球蛋白的缺点，其包括有限的剂量、注射部位的疼痛和免疫球蛋白的抗体被蛋白酶降低，并且达到峰值血药浓度耗费的时间也降低到几个小时或更少。