[发明专利]细胞中代谢物的生产和检测

权利要求书

1.一种选择用于生产代谢物的微生物亚组的方法，包括

提供微生物群；

其中该微生物群已经遗传修饰以包括编码报告物的外源DNA，

其中所述微生物群已经遗传修饰以包括编码传感器分子的外源DNA，其表达时调节所述微生物表达所述报告物，

其中所述微生物群已经遗传修饰以包括外源DNA编码基因以产生所述传感器的代谢物结合伴侣，

并且其中所述微生物产生所述代谢物结合伴侣，所述代谢物结合伴侣结合所述传感器，从而以依赖于产生的代谢物的浓度的方式诱导所述报告物的表达，并且

通过检测所述报告物来筛选所述微生物群以鉴定微生物亚组。

2.如权利要求1所述的方法，其中所述报告物是荧光蛋白。

3.如权利要求1所述的方法，其中所述报告物选自：mPlum，mCherry，tdTomato，mStrawberry，J-Red，DsRed-单体，mOrange，mKO，mCitrine，Venus，YPet，EYFP，Emerald，EGFP，CyPet，mCFPm，Cerulean，T-Sapphire，萤火虫(FLuc)，改良萤火虫(Ultra-Clo)，叩头虫(CBLuc)，海肾(RLuc)，桡足类甲壳动物(GLuc)，和介形类甲壳动物(CLuc)。

4.如权利要求1所述的方法，其中所述筛选通过以下进行：荧光活化的细胞分选，显微分析，微量滴定板测定法，乳液测定，微流体测定，下拉测定或荧光素酶高通量筛选。

5.如权利要求1所述的方法，其中所述传感器生物分子和所述代谢物结合伴侣选自由下述成员对组成的组：cdaR/葡糖二酸，ttgR/柚皮素，btuB核糖开关/钴胺素，mphR/大环内酯类，tetR/四环素衍生物，benM/黏康酸，alkS/中链正烷烃，xylR/木糖，araC/阿拉伯糖，gntR/葡萄糖酸盐，galS/半乳糖，trpR/色氨酸，qacR/黄连素，rmrR/植物抗毒素，cymR/苯甲酸异丙酯，melR/蜜二糖，rafR/棉子糖，nahR/水杨酸盐，nocR/胭脂碱，clcR/氯苯甲酸盐，varR/维及霉素，rhaR/鼠李糖，PhoR/磷酸盐，MalK/苹果酸盐，GlnK/谷氨酰胺，视黄酸受体/视黄酸，雌激素受体/雌激素和雄激素受体/雄激素。

6.如权利要求1所述的方法，所述方法还包括

遗传修饰所述微生物亚组以改变直接或间接影响所述代谢物生产的基因，和

通过检测所述报告物来筛选所述微生物亚组以鉴定后续微生物亚组。

7.一种修饰微生物以包括对应于代谢物的传感器生物分子的方法，包括

遗传修饰所述微生物以包括编码所述传感器生物分子的外源DNA，其调节所述微生物表达编码蛋白质的基因，

遗传修饰所述微生物以包括外源DNA编码基因以产生对应于所述传感器的代谢物，

并且其中所述微生物产生所述代谢物，所述代谢物结合所述传感器，从而以依赖于产生的代谢物的浓度的方式诱导所述蛋白质的表达，并且

其中所述传感器是AcuR并且所述代谢物是丙烯酸盐或

其中所述传感器是ttgR并且所述代谢物是苯酚。

8.如权利要求7所述的方法，其中所述微生物经遗传修饰以包括编码所述蛋白质的外源DNA。

9.如权利要求8所述的方法，其中所述蛋白质是荧光蛋白。

10.如权利要求8所述的方法，其中所述蛋白质选自：mPlum，mCherry，tdTomato，mStrawberry，J-Red，DsRed-单体，mOrange，mKO，mCitrine，Venus，YPet，EYFP，Emerald，EGFP，CyPet，mCFPm，Cerulean，T-Sapphire，萤火虫(FLuc)，改良萤火虫(Ultra-Clo)，叩头虫(CBLuc)，海肾(RLuc)，桡足类甲壳动物(GLuc)，和介形类甲壳动物(CLuc)。

11.如权利要求8所述的方法，其中所述蛋白质是毒素的解毒剂。