[发明专利]用于检测致病性钩端螺旋体菌株的测定

说明书

发明领域

一般而言，本发明涉及用于检测测试样品中致病性钩端螺旋体的组合物和方法。

发明背景

提供发明背景的下述讨论仅为辅助读者理解本发明，而并非承认本发明描述或构成现有技术。

钩端螺旋体病是由钩端螺旋体属的水性螺旋体引起的。直到最近，通过血清学数据将钩端螺旋体种分为两种，问号钩端螺旋体(L.interrogans)和非致病性双曲钩端螺旋体(L.biflexa)，共包含230多种血清变型。更近期地，序列信息已经允许将钩端螺旋体分为16个基因种，包括问号钩端螺旋体、双曲钩端螺旋体、L.kirshneri和L.borgpetersenii。不幸的是，不能将这些种整齐分类为致病性和非致病性，因为两类血清变型都存在于任何给定的基因种中。尽管存在该复杂性，问号钩端螺旋体血清变型出血性黄疸型(L.interrogans serovars icterohaemorrhagiae)、copenhageni、lai、australis和autumnalis是人类中最常见的，其中黄疸出血型钩端螺旋体通常引起最严重的症状。

尽管不需要直接接触，钩端螺旋体感染的来源是通过暴露于受感染动物的尿液。感染经常在已经接触过受污染水体的患者中发现。钩端螺旋体经由切口和擦伤或与粘膜接触进入体内，温育持续2-20天。该细菌首先感染血液，然后感染CSF，通常在出现症状后第三周从两者中清除。钩端螺旋体可以在症状发作后一周内在尿液中发现，不治疗下可以继续存在数月或数年。

钩端螺旋体病的症状具有广泛的严重性。大多数感染个体无症状或有温和的症状，且不寻求医疗救助。然而有些人有能导致死亡的更严重的症状。症状可能突然发生，包括发烧、发冷、头痛、身体疼痛、腹痛、结膜充血，有时是皮肤疹。头痛和肌痛可能是严重的，且高达25％的患者患有无菌性脑膜炎。所有钩端螺旋体病患者中的5％至10％患有黄疸性钩端螺旋体病，有时称为外韦尔病(Weil’s disease)，这是更严重的情况，病例中5％至15％是致死的。症状包括先天性疾病中的那些，并且在许多病例中也可以包括黄疸、肝衰竭或急性肾功能衰竭。呼吸和心脏的牵涉也是常见的，并且可能导致呼吸窘迫综合征或心肌炎。

在临床环境中检测钩端螺旋体是麻烦的。血清学研究是耗时和复杂的，且培养可能需要6至26周。此外，该细菌在尿液中迅速丧失活力，原代样品类型和培养测试提供有限的效用。与此相反，实时PCR检测是快速、灵敏的，且不需要生物体的活力。样品可以冷冻或与防腐剂混合用于运输。虽然钩端螺旋体的分类学是复杂的，但16S序列数据表明致病性和非致病性亚种可以通过PCR区分。设计公开的方法和组合物以仅检测致病性的种。没有检测如双曲钩端螺旋体(L.biflexa)的非致病种。此外，利用基于PCR的方法将允许测试血液、CSF或尿液，以便在早期测试时给出感染阶段的指示。