[发明专利]用于检测致病性钩端螺旋体菌株的测定

权利要求书

1.一种基本上纯化的寡核苷酸，其具有选自下组的序列：

5’-AGT AAC ACG TGG GTA ATC TTC CT-3’(SEQ ID NO:1)，

5’-TCTCTCGGGACCATCCAGTA-3’(SEQ ID NO:2)，和

5’-TGGGATAACTTTCCGAAAGGGAAG C-3’(SEQ ID NO:3)，

其中，所述寡核苷酸直接或间接地附接至可检测的标记物。

2.如权利要求1的寡核苷酸，其中所述可检测的标记物是荧光染料。

3.如权利要求1的寡核苷酸，其中所述可检测的标记物包含报告染料和淬灭剂。

4.如权利要求3的寡核苷酸，其中所述寡核苷酸是5’[6～FAM]–TGGGATAACTTTCCGAAAGGGAAGC–[BHQ-1]3’。

5.基本上纯的寡核苷酸引物对，其包含SEQ ID NO：1和SEQ ID NO：2。

6.一种用于鉴定样品中致病性钩端螺旋体的存在或缺乏的检测方法，其包括通过以下检测16S靶核酸的存在或缺乏：

(a)提供适于扩增所述16S靶核酸或其片段的引物对，并提供适于与所述16S靶核酸或其片段杂交的可检测标记的探针，其中所述引物对中的至少一个成员包含SEQ ID NO:1或SEQ ID NO:2；

(b)当所述16S靶核酸存在于所述样品中时，在适于产生第一反应产物的条件下，进行包含步骤(a)的所述引物对的引物延伸反应；以及

(c)通过检测所述探针的可检测的标记物的存在或缺乏来确定致病性钩端螺旋体的存在或缺乏，

所述16S靶核酸包含与SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:5、SEQ ID NO:6、SEQ ID NO:11、SEQ ID NO:12、SEQ ID NO:13或其片段或互补物至少95％相同的至少15个连续的核苷酸，

其中所述16S靶核酸的存在鉴定致病性钩端螺旋体的存在。

7.如权利要求6的方法，其中所述引物对中的至少一个成员由SEQ ID NO:1或SEQ ID NO:2组成。

8.如权利要求6的方法，其中所述可检测标记的探针包含SEQ ID NO:3。

9.如权利要求6的方法，其中所述可检测标记的探针由5’[6～FAM]-TGGGATAACTTTCCGAAAGGGAAGC-[BHQ-1]3’组成。

10.一种用于检测测试样品中致病性钩端螺旋体核酸的存在或量的方法，包括：

(a)如果致病性钩端螺旋体核酸存在于所述样品中，使用具有SEQ ID NO：1和SEQ ID NO：2所示序列的寡核苷酸引物对扩增致病性钩端螺旋体核酸；

(b在酶存在的情况下，将所述扩增的致病性钩端螺旋体核酸与具有SEQ ID NO：3所示序列的寡核苷酸探针杂交，当所述探针与所述致病性钩端螺旋体核酸杂交时，所述酶切割所述探针；以及

(c)检测来自所述探针的信号，其中所述信号指示所述测试样品中致病性钩端螺旋体核酸的存在或量。

11.如权利要求10的方法，其中所述测试样品选自下组：血清、血液、血浆、脑脊髓液、滑液和尿液。

12.如权利要求10的方法，其中所述致病性钩端螺旋体核酸在所述扩增步骤(a)之前从所述样品提取。

13.如权利要求10的方法，其中所述探针包含报告染料和淬灭剂。

14.如权利要求13的方法，其中所述报告染料是6～FAM。

15.如权利要求13的方法，其中所述淬灭剂是BHQ-1。