[发明专利]半静态细胞培养

权利要求书

1.一种方法，包含：

(i)将细胞接种至非静态生物反应器中；

(ii)将抗原刺激添加至所述非静态生物反应器；

(iii)将至少细胞生长辅助因子添加至所述非静态生物反应器；

(iv)使所述细胞扩增，以导致临床相关的细胞产物；

其中，实行步骤(ii)，其中，所述非静态生物反应器保持于第一摇摆速率下；

且其中，实行步骤(iv)，其中，所述非静态生物反应器保持于第二摇摆速率下，该第二摇摆速率比所述第一摇摆速率更高。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，在步骤(iv)的期间，将步骤(ii)和(iii)重复一次或更多次。

3.根据权利要求1或权利要求2所述的方法，其特征在于，所述细胞为白细胞。

4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，所述白细胞选自包含淋巴细胞、单核细胞或从单核细胞导出的细胞的组。

5.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，所述白细胞为外周血单核细胞(PBMC)。

6.根据权利要求1-5中的任一项所述的方法，其特征在于，在步骤(i)中，所述细胞为细胞悬浮液。

7.根据权利要求1-6中的任一项所述的方法，其特征在于，所述非静态生物反应器包含柔性细胞袋。

8.根据权利要求1-7中的任一项所述的方法，其特征在于，所述抗原刺激包含抗原肽或肿瘤裂解液。

9.根据权利要求1-8中的任一项所述的方法，其特征在于，使所述细胞扩增的所述步骤包含定期地更换培养基。

10.根据权利要求1-9中的任一项所述的方法，其特征在于，所述细胞生长辅助因子包含抗CD28和/或抗CD3单克隆抗体。

11.根据权利要求10所述的方法，其特征在于，在本发明的方法中，在所述扩增步骤(iv)之前，添加所述细胞生长辅助因子。

12.根据权利要求10所述的方法，其特征在于，所述细胞生长辅助因子是细胞因子或一大堆混合的细胞因子。

13.根据权利要求12所述的方法，其特征在于，所述细胞因子选自白细胞介素-2(IL-2)、白细胞介素-4(IL-4)、白细胞介素-7(IL-7)、白细胞介素-12(IL-12)、白细胞介素-15(IL-15)以及白细胞介素-21(IL-21)。

14.根据权利要求12或权利要求13所述的方法，其特征在于，在本发明的方法中，在所述扩增步骤(iv)之前，添加所述细胞生长辅助因子。

15.根据权利要求12-14中所述的方法，其特征在于，在所述扩增步骤(iv)的期间，定期的所述细胞生长辅助因子。

16.根据权利要求1-15中的任一项所述的方法，其特征在于，所述临床相关的细胞产物包含抗原特异性的T细胞、监管的T细胞或转基因的PBMC。

17.根据权利要求16所述的方法，其特征在于，所述临床相关的细胞产物包含抗原特异性的T细胞或转基因的PBMC。

18.根据权利要求16或权利要求17所述的方法，其特征在于，所述抗原特异性的T细胞为细胞毒素病毒特异性的T细胞或肿瘤特异性的T细胞。

19.根据权利要求16或权利要求17所述的方法，其特征在于，所述转基因的PBMC为嵌合抗原受体(CAR)T和TCR转基因的T细胞。

20. 根据权利要求1-19中的任一项所述的方法，其特征在于，所述第一摇摆速率不大于4 rpm，且处于不大于4度的角度。

21. 根据权利要求20所述的方法，其特征在于，所述第一摇摆速率在2-4 rpm之间，且处于2-4度之间的角度。

22. 根据权利要求1-21中的任一项所述的方法，其特征在于，第二摇摆速率大于4 rpm，且处于大于4度的角度。

23. 根据权利要求22所述的方法，其特征在于，所述第二摇摆速率高达25 rpm，且处于高达15度的角度。