[发明专利]乙酰乳酸脱羧酶

说明书

本披露提供了包含具有更好的稳定性和/或活性的ALDC酶的方法、组合物、装置和试剂盒，并且任选地，从微生物中可以回收的ALDC酶的产率得以改善。在一些实施例中，本披露提供了使用金属离子以增加稳定性和/或活性的方法、装置、组合物和试剂盒，并且所述方法、装置、组合物和试剂盒还可用于以改善的产率从微生物中回收所述酶。

相关申请的交叉引用

本申请要求于2015年5月22日提交的美国临时专利申请号62/165671；于2015年5月26日提交的美国临时专利申请号62/166610；以及于2015年5月29日提交的美国临时专利申请号62/168406；题为“ALDC”的每个临时申请的优先权和权益。

通过引用并入序列表

将于2016年5月5日创建并同时提交的、以大小为16,666字节、名称为“20160505_NB40736_PCT_SEQS_ST25.txt”的文件形式提供的序列表通过引用以其全文并入本文。

发明背景

有时，二乙酰是含碳水化合物物质(例如，麦芽汁或葡萄汁)在发酵过程中不希望产生的副产物。二乙酰的形成是最不利的，因为二乙酰具有强烈且难闻的气味，并且在啤酒发酵过程中，即使少量的约0.10至0.15mg/升的二乙酰对啤酒的风味和味道也具有负面影响。在啤酒成熟期间，二乙酰被酵母细胞中的还原酶转化成乙偶姻。关于啤酒中可接受的味道和风味，乙偶姻的浓度要高于二乙酰。

乙酰乳酸脱羧酶(ALDC)也可以用作酶，以防止形成二乙酰。可以通过在发酵过程中添加ALDC酶，将α-乙酰乳酸转化成乙偶姻。然而，ALDC在发酵条件下可能不稳定，特别是那些麦芽含量低的发酵麦芽汁的ALDC。

本发明的目的是提供具有更好的稳定性和/或活性的ALDC酶，并且任选地，从微生物中可以回收的ALDC酶的产率得以改善。

发明内容

本披露提供了针对ALDC酶的组合物和方法。

在以下分别编号的段落中阐述了组合物和方法的多个方面和实施例。

1.一种组合物，其包含乙酰乳酸脱羧酶(ALDC)和锌，其中所述锌以约1μM至约200mM的浓度存在。

2.如段落1所述的组合物，其中所述锌以如下浓度存在：约10μM至约150mM、或约20μM至约120mM、或约25μM至约100mM、或约25μM至约50mM、或约25μM至约20mM、或约25μM至约50μM、或约100μM至约20mM、或约250μM至约20mM、或约500μM至约20mM、或约1mM至约20mM、或约1mM至约10mM、或约1mM至约5mM。

3.如任何前述段落所述的组合物，其中所述锌以约100μM至约10mM的浓度存在。

4.如任何前述段落所述的组合物，其中所述锌以约1mM至约5mM的浓度存在。如任何前述段落所述的组合物，其中锌与ALDC酶的摩尔比高于1；或者是2:1或更高；或者是10:1或更高；或者是20:1或更高；或者是30:1或更高；或者是60:1或更高。

5.如任何前述段落所述的组合物，其中所述ALDC酶是ALDC衍生物。

6.如段落5所述的组合物，其中所述ALDC衍生物是用戊二醛处理过的ALDC酶。

7.如段落6所述的组合物，其中以对应于约0.1g至约5g戊二醛/g纯ALDC酶的浓度用戊二醛处理所述ALDC酶。

8.如任何前述段落所述的组合物，其中所述ALDC酶的活性在950至2500单位/mg蛋白质的范围内。

9.如任何前述段落所述的组合物，其中所述ALDC酶的活性在1000至2500单位/mg蛋白质的范围内。