[发明专利]分离、除去、和分析细胞的方法

说明书

本发明目的在于提供一种分离、除去、和分析细胞的方法。提供的前述分离、除去、和分析细胞的方法包括，将包含细胞的液体样品通过聚酰亚胺多孔膜过滤，针对未能通过聚酰亚胺多孔膜而被膜捕捉的细胞、或通过聚酰亚胺多孔膜的液体样品中的细胞，对选自由以下组成的组的一个以上的细胞的特性进行检查：细胞的数量或种类，细胞的外部或内部结构，细胞表面抗原的种类或量，细胞来源的分泌物质的种类或量、细胞附着性和细胞生存率。

技术领域

本发明涉及，使用聚酰亚胺多孔膜，分离、除去、和分析细胞的方法。

背景技术

细胞的特性

细胞在体内一般作为三维群体存在，在经典的平面培养中，细胞以粘到容器的形式单层培养。由于培养环境的差异，细胞性质也显著不同的情况被报告许多。此外，对于在液体培养培养基中培养细胞的悬浮培养，存在适合于悬浮培养的细胞，也不适合于悬浮培养的的细胞。

近年来，通过药物发现研究的加速和评价技术的改进，使用这些细胞的各种评价体系和试剂盒已经被开发出来。通过将物质产生量通过抗原抗体反应和酶反应的组合作为显色反应的ELISA试剂盒或由两个对象部位的接近度将发生能量转移的现象作为光进行测量的形式而被利用的FRET和BRET等，通过许多原理，新的高灵敏度，高强度和高选择性的方法已被开创(非专利文献1和2)。

在这些筛选方法，将细胞转移现象作为原理的各种试剂盒与方法也被制定并实施。例如专利文献1中记载的，在汇合的培养细胞中制备孔部，并将所述孔部的填充现象作为伤口愈合速度而进行比较的方法，如在专利文献2中记载的，通过插入培养样(インサートカルチャー)的结构穿过一定大小的多个孔，由细胞的移动比较化合物趋化性的方法已被开发。特别是，在专利文献2中记载的方法已经以各种形式应用和实现。此外，如通过将细胞运动本身作为目标捕捉、并确定细胞布朗运动和原形质流动流动、追查原形质流动流动、进行评价的专利文献3或活用喷墨、在狭窄的区域中规则播种大量细胞、对该运动进行示踪调查的专利文献4这样的尝试也正在进行。

当将使用细胞运行性能和转移现象用于药物开发等的评价，由以前的研究组在定量性和明确性方面所表示，由于能够澄清深感兴趣的细胞的特性，成为非常有吸引力的方法，但是，在另一方面，非常复杂的系统和复杂设备成为必要的情况和时间或处理中需要很多功夫的情况有许多，更简单、快速评价方法的建设已被期望。

此外，从生物体来源的样品取决于或生物体的一部分或所有的状态、其中包含的细胞可以变化的情况存在。例如，基于细胞的状态变化，与某种病因关联、除去活化的白细胞的治疗法也被知晓。

血液样品来源的血液成分除去疗法

血液，以白细胞和红细胞作为起始，包含许多细胞种类。对于如自身免疫性疾病的细胞性疾病，活性过高自细胞导致过度反应的情况被知道，由药物导致的免疫反应的抑制或细胞本身的消除，被用作医疗实践而采用。例如，将珠或纤维填充为圆柱状，在其空间中使血液通过，由此将高附着性淋巴细胞和细胞除去，由此对风湿性疾病和克罗恩氏病或溃疡性结肠炎等进行治疗的方法已被知道(专利文献5、6、7和非专利文献3)。此外，验证对于呼吸系统疾病的有效性的研究被显示(非专利文献4)。此外，将抗体固定化至表面上的珠包装为柱形状，选择地获得呈递的相同抗原的细胞的方法也有报道(专利文献8)。

这些载体使用纤维或珠(小珠)等，在结构上是线性的和球形的集合体，缺乏与生物体结构的相似性，并非具有在结构上取得细胞的特性，因此，提供许多机会，吸附附着性强的细胞是有必要的。长时间接触设备，诱导意想不到血栓形成和血细胞活化成为主要原因，因此，更简单快速和血液活化性能低的细胞除去方法已经被期望。因此，如果不仅血细胞，而且生物体来源的样品中细胞的特性能够被简单和快速地评估，则导致生物体的简单和快速的评估被涉及。

聚酰亚胺多孔膜