[发明专利]分离、除去、和分析细胞的方法有效
申请号: | 201680007161.0 | 申请日: | 2016-01-26 |
公开(公告)号: | CN107208126B | 公开(公告)日: | 2021-06-22 |
发明(设计)人: | 深水昭吉;金俊达;萩原昌彦;和田幸周 | 申请(专利权)人: | 宇部兴产株式会社;国立大学法人筑波大学 |
主分类号: | C12Q1/02 | 分类号: | C12Q1/02;C12M1/34;C12M3/06;C12N5/078;G01N1/10;G01N33/15;G01N33/50 |
代理公司: | 中国贸促会专利商标事务所有限公司 11038 | 代理人: | 邵华一 |
地址: | 日本*** | 国省代码: | 暂无信息 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 分离 除去 分析 细胞 方法 | ||
1.分离、除去、和/或分析细胞的方法,其包括,将包含细胞的液体样品通过聚酰亚胺多孔膜过滤,针对未能通过聚酰亚胺多孔膜而被膜捕捉的细胞、或通过聚酰亚胺多孔膜的液体样品中的细胞,对选自由以下组成的组的一个以上的细胞的特性进行检查:细胞的数量或种类,细胞的外部或内部结构,细胞表面抗原的种类或量,细胞来源的分泌物质的种类或量、细胞附着性和细胞生存率,其中,前述聚酰亚胺多孔膜为三层结构的聚酰亚胺多孔膜,前述三层结构具有表面层A和表面层B、和夹在前述表面层A和表面层B之间的大空隙层,前述表面层A和表面层B具有多个孔,前述表面层A中存在的孔的平均孔径小于前述表面层B中存在的孔的平均孔径,前述大空隙层具有结合到前述表面层A和B的隔壁,由所述隔壁和前述表面层A和B所包围的多个大空隙。
2.权利要求1中记载的方法,成为对象的细胞是活化的细胞。
3.权利要求2中记载的方法,活化的细胞是活化白细胞。
4.权利要求1中记载的方法,包括在过滤工序前,将聚酰亚胺多孔膜的表面的全部或一部分预处理的工序。
5.权利要求4中记载的方法,聚酰亚胺多孔膜的表面处理使用选自由以下组成的组的一种以上试剂或处理方法来进行:抗凝血剂,胶原蛋白,聚-L-赖氨酸,UV,等离子体和结合亲水树脂的PDS。
6.权利要求1中记载的方法,包括向含有细胞的液体样品中添加细胞活化剂后,培养细胞,然后将所述液体样品通过聚酰亚胺多孔膜过滤。
7.一种用于筛选细胞活化抑制物质的方法,其包括:
(i)任选地向含有细胞的液体样品中添加细胞活化剂后,培养细胞,
(ii)向(i)的液体样品中添加测试物质,
(iii)将(ii)的液体样品通过聚酰亚胺多孔膜过滤,针对未能通过聚酰亚胺多孔膜而被膜捕捉的细胞、或通过聚酰亚胺多孔膜的液体样品中的细胞,对选自由以下组成的组的一个以上的细胞的特性进行检查:细胞的种类或数量,细胞的外部或内部结构,细胞表面抗原的种类或量,细胞来源的分泌物质的种类或量、细胞附着性和细胞生存率,并且,
(iv)如果未能通过聚酰亚胺多孔膜而被膜捕捉的细胞中、活化的细胞的比例和/或数目比(ii)的工序中没有加入测试物质的情况减小,或者,如果通过聚酰亚胺多孔膜的液体样品中的细胞中、活化的细胞的比例和/或数目比(ii)的工序中没有加入测试物质的情况增加,那么确定测试物质是细胞活化抑制物质,
其中,前述聚酰亚胺多孔膜为三层结构的聚酰亚胺多孔膜,前述三层结构具有表面层A和表面层B、和夹在前述表面层A和表面层B之间的大空隙层,前述表面层A和表面层B具有多个孔,前述表面层A中存在的孔的平均孔径小于前述表面层B中存在的孔的平均孔径,前述大空隙层具有结合到前述表面层A和B的隔壁,由所述隔壁和前述表面层A和B所包围的多个大空隙。
8.权利要求1~7中任一项中记载的方法,含有细胞的液体样品是细胞悬浮液,其包含选自原代细胞、确立细胞和血液分离细胞的一种以上细胞。
9.权利要求1~7中任一项中记载的方法,含有细胞的液体样品是选自由以下组成的组的生物样品:血液,尿,汗,贮存体腔液,体腔清洗液和痰液。
10.权利要求1~7中任一项中记载的方法,过滤选自由以下组成的组:自然过滤,离心过滤,减压过滤和加压过滤。
11.权利要求1~7中任一项中记载的方法,包括,将通过聚酰亚胺多孔膜的液体样品中的细胞进一步培养。
12.权利要求1~7中任一项中记载的方法,包括,将未能通过聚酰亚胺多孔膜而被膜捕捉的细胞,在保持将所述细胞施加于聚酰亚胺多孔膜的状态进行进一步培养。
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